微量鼠脑样本如何提取高质量RNA？粤港澳大湾区脑科学与类脑研究中心客户demo
发布时间:2026-09-14
做脑科学相关基因验证，很多课题组会碰到珍贵微量脑组织样本：组织量少、后续还有其他实验安排，一旦 RNA 提取环节损耗过大，样本很难复得。传统苯酚‑氯仿抽提流程操作步骤多，对于毫克级脑组织，很容易出现样本损耗、RNA 得率偏低，造成珍贵实验材料浪费。
近期信天翁生物技术人员前往粤港澳大湾区脑科学与类脑研究中心（南方医科大学）开展线下实操 Demo。课题组同学间隔较长时间未开展核酸提取实验，手上的小鼠大脑表层组织样本十分有限，组织重量不足 10 mg，仅芝麻大小。该样本仅允许取用小部分用于基因敲除 qPCR 验证，剩余大部分组织样本需要留存开展 WB 蛋白检测，样本容错空间有限，难以承受实验失败带来的样本损耗。
本次 Demo 选用信天翁动物组织 RNA 提取试剂盒（400-103），全程规避苯酚、氯仿等有毒有机试剂，操作流程简洁，对于久未上手实验的人员也相对友好。
实验地点：粤港澳大湾区脑科学与类脑研究中心（南方医科大学）
使用产品：信天翁 动物组织 RNA 提取试剂盒（400-103）
样本类型：小鼠大脑表层微量脑组织，组织重量＜10 mg；剩余组织样本留存用于 WB 实验
实验目的：少量样本提取总 RNA，完成基因敲除 qPCR 验证
实测样本 RNA 浓度：24.2 ng/μL、25.5 ng/μL、55.0 ng/μL、46.8 ng/μL、20.2 ng/μL，浓度区间 20~55 ng/μL
质控检测：紫外分光光度扫描曲线，未见明显杂质吸收峰
下游应用：反转录后开展 qPCR 基因敲除验证；扩增重复性、特异性表现较好，适配本次实验需求
提取出的RNA紫外分光光度计检测结果
下游实验qPCR扩增曲线
下游实验qPCR溶解曲线
提示：脑组织脂质含量偏高，样本建议保持低温状态，避免反复冻融；微量样本尽量减少转移步骤，降低管壁吸附造成的核酸损失。
样本裂解处理 取不足 10 mg 小鼠脑组织样本，置于无 RNase 离心管，加入试剂盒配套裂解液，使用组织研磨工具充分匀浆裂解，充分释放组织内核酸。微量样本研磨过程尽量减少管壁残留。
核酸结合纯化 裂解完成后按照试剂盒说明书比例加入无水乙醇，充分混匀，将混合液体转移至 RNA 纯化柱，离心结合核酸。
洗涤除杂 依次加入试剂盒内洗涤缓冲液，离心去除蛋白、脂质、盐离子等杂质；每步离心后注意彻底弃除收集管废液。微量样本建议充分甩干柱膜残留乙醇，避免乙醇残留干扰后续洗脱与下游 qPCR。
核酸洗脱收集 向纯化柱柱膜中央加入小体积无 RNase 洗脱缓冲液，静置后离心洗脱，收集得到总 RNA；微量脑组织可选用偏小洗脱体积，适度提升核酸浓度。收集后的 RNA 建议尽快分装，‑80℃保存。
脑组织离体后应尽快置于液氮或干冰中速冻，避免反复冻融。反复冻融会产生冰晶破坏细胞结构、释放内源性核酸酶和蛋白酶，同时导致RNA降解和蛋白降解/修饰，影响后续qPCR、WB等实验结果。
研磨和移液转移应尽量精简步骤，减少样本在管壁和枪头内壁的吸附损耗；毫克级微量样本尤其建议使用低吸附枪头和低吸附离心管，避免不必要的稀释和转移。
多份微量脑组织并行处理时，裂解步骤建议分批进行，避免因操作时间差导致各样本裂解时长不一致；纯化、洗涤和离心步骤则可批量并行，以压缩整体处理时长，减少样本降解风险。
可以。本次粤港澳大湾区脑科学与类脑研究中心实测可见，5 份不足 10 mg 鼠脑表层组织样本，RNA 浓度落在 20‑55 ng/μL 区间，紫外扫描图谱质量良好；核酸产物经过反转录之后可开展 qPCR 基因敲除验证，扩增重复性、特异性表现较好。
可以。实验时只取用部分脑组织用于 RNA 提取，其余组织保持低温保存，用于后续 WB 检测；需要注意脑组织样本避免反复冻融，兼顾 RNA 完整性与蛋白样本质量。
不需要。该试剂盒采用硅胶柱纯化体系，全程无需苯酚、氯仿等有毒有机试剂，不用做有机相分层，降低实验人员接触有害试剂的风险，也简化操作流程。
整套流程为标准化柱式提取，步骤精简，规避酚‑氯仿分层这类难度较高的操作；不过微量脑组织样本总量有限，依旧需要注意规避样本反复冻融、减少管壁吸附，遵循说明书规范操作，有助于得到理想实验结果。
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