一步法 PAGE 凝胶快速配制试剂盒8%
彩色上层胶加样方便 条带平整易出图
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- 产品描述
- 组成成分
- 注意事项
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产品简介
本试剂盒适用于丙烯酰胺凝胶的一步法配制 ，采用上层胶和下层胶的预混方式，只需将试剂两两混合，加入促凝剂即可凝胶，无需额外添加 TEMED，方便高效。灌入下层胶后，无需液封，直接灌入上层胶即可。所配的上层胶带有(红、黄、绿、蓝)四种颜色，方便点样及区分含有不同样品的凝胶，颜料不影响电泳及染色。本试剂盒可配制 125 块 mini PAGE胶(以0.75 mm 厚度胶计算) ，配制的凝胶可用于变性或非变性 PAGE 凝胶电泳。
货号规格
货号 可制胶数量 600-100 (制备 6% PAGE 凝胶) 125 块(0.75mm 胶)
或
>90 块(1.00mm 胶)
或
>60 块(1.50mm 胶)
600-101 (制备 8% PAGE 凝胶) 600-102 (制备 10% PAGE 凝胶) 600-103 (制备 12% PAGE 凝胶) 600-104 (制备 15% PAGE 凝胶) 制胶流程
(以制备一块 0.75/1.0/1.5 mm 的 mini 胶为例)
下层胶配方 上层胶配方 凝胶厚度 下层胶 A1 下层胶 A2 促凝剂 凝胶厚度 上层胶 B1 上层胶 B2 促凝剂 0.75 mm 2.0 ml 2.0 ml 40 µl 0.75 mm 0.5 ml 0.5 ml 6 µl 1.0 mm 2.7 ml 2.7 ml 60 µl 1.0 mm 0.75 ml 0.75 ml 9 µl 1.5 mm 4.0 ml 4.0 ml 80 µl 1.5 mm 1.0 ml 1.0 ml 12 µl 请严格按照下面步骤操作 ，各组分在使用前请颠倒混匀 5-10 次。
1. 取等体积下层胶 A1和下层胶 A2 ，各 2.0/2.7/4.0 ml，混匀，备用；
2. 取等体积上层胶 B1 和上层胶 B2，各 0.5/0.75/1.0 ml，混匀，备用；
3. 向步骤 1 的混合溶液中加入 40/60/80 μl 的改良型促凝剂，立即涡旋混匀，将混匀后的溶液注入制胶玻璃板中，使液面和短玻璃板上沿之间的距离比梳齿长 0.5 cm 即可；
注意：此溶液为过量，请勿全部注入。
4. 向步骤 2 的混合溶液中加入 6/9/12 μl 的改良型促凝剂, 立即涡旋混匀，无需等待下层胶凝固，即可将混匀后的溶液轻缓注入制胶玻璃板中，插入梳齿 ，待胶凝固(室温约 10~20 min)。
注意：灌注上层胶溶液时要点样式轻缓加入，避免将上层胶溶液冲入下层胶。
胶凝固后上下层胶分界线平整度略弱于传统方法配的胶，但对后续电泳无明显影响。
5. 电泳电压： 100V-150 V ，可根据个人习惯调整。
注意：一般上层胶 100-120V、下层胶 120-150V 电压电泳。
流程示意图
凝胶浓度选择参考
分离胶浓度 最佳分离范围 6% 50-150 kDa 8% 30-90 kDa 10% 20-80 kDa 12% 12-60 kDa 15% 10-40 kDa 附：一步法制胶 ，电泳后的胶图。
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产品组分/储存条件
组分名称 体积 保存 有效期 运输 上层胶 B1 80 ml 2-8℃ 12 个月 促凝剂冰袋运输，其他组分常温运输
上层胶 B2 80 ml 2-8℃ 12 个月 下层胶 A1 250 ml 2-8℃ 12 个月 下层胶 A2 250 ml 2-8℃ 12 个月 改良型促凝剂
8 ml 2-8℃ 3 个月 -20℃ 12 个月 -
注意事项
1. 促凝剂的使用量仅供参考，实际用量可根据室内温度及个人经验调整。促凝剂开盖后，可在 4℃保存至少 3 个月。
2. 凝胶速度受温度影响明显，室温过高时，可适当减少促凝剂用量；如室温较低可适当延长凝胶时间或增加促凝剂用量。
3. 在配胶之前，试剂溶液置于室温一段时间，使其平衡至室温，有利于胶的凝固及有效避免胶中气泡的形成。
4. 上层胶勿全部加入 ，剩余体积方便观察胶凝固状态。
5. 如果需要制备多块凝胶，建议一管一次性加入不超过 2 块凝胶的试剂量；如果试剂加入过多，则在灌入玻璃板之前部分已凝固，不利于制备高质量凝胶，影响后续实验。
6. 丙烯酰胺具有神经毒性，请穿实验服并戴一次性手套和口罩操作。
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