APC Mouse Anti-DYKDDDDK tag Antibody（MFG-01）
应用：
FC
种属反应性：
tag
宿主种属：
Mouse
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-
NeoMab® · APC Mouse Anti-DYKDDDDK Tag Antibody (MFG-01) · 16-7021-12 / 16-7021-15
产品简介
NeoMab® APC 标记小鼠抗 DYKDDDDK Tag 单克隆抗体（克隆号 MFG-01），0.2 mg/mL，推荐用量 ≤0.125 µg/百万细胞，Ex/Em 651/660 nm，适用于转染或过表达细胞中DYKDDDDK（FLAG）标签蛋白的流式细胞术检测。2-8℃ 避光保存，有效期两年。
DYKDDDDK 标签是一种广泛使用的短肽标签序列（Asp-Tyr-Lys-Asp-Asp-Asp-Asp-Lys），常用于蛋白表达研究中作为检测和纯化的分子标签。该标签序列分子量小、亲水性强，倾向于定位于蛋白表面，不影响目的蛋白的天然构象与活性。由于该序列在大多数生物体中不存在天然同源序列，背景信号极低，检测特异性高。
核心参数
参数 规格 品牌 NeoMab® 货号 16-7021-12（25 µg）/ 16-7021-15（100 µg） 克隆号 MFG-01 宿主 Mouse 反应性 Exogenously expressed proteins with DYKDDDDK tag 同种型 Mouse IgG1, κ 抗体类型 单克隆抗体 标记物 APC Ex/Em 651 / 660 nm 抗体浓度 0.2 mg/mL 推荐用量 ≤0.125 µg/百万细胞（100 µL 染色体系），建议滴定优化 应用 Flow Cytometry（流式细胞术） 保存 2-8℃ 避光保存，不可冷冻，有效期两年
DYKDDDDK 标签背景
DYKDDDDK 是一种短肽标签序列（8 个氨基酸：Asp-Tyr-Lys-Asp-Asp-Asp-Asp-Lys），也被称为 FLAG®-tag。该标签因其分子量小（~1 kD）、亲水性强、带电性好的特点，通常定位于融合蛋白的表面，易于被抗体识别和结合，且不会显著干扰目的蛋白的天然结构与生物学活性。
由于 DYKDDDDK 序列在大多数生物体基因组中不存在天然同源序列，使用该标签融合表达目的蛋白后，背景信号极低，检测特异性高。DYKDDDDK 标签广泛应用于：外源蛋白表达验证、蛋白相互作用研究（Co-IP）、蛋白纯化（抗 FLAG 亲和层析）、细胞内定位分析等。
流式染色流程
一、制备单细胞悬液
收集目标细胞（转染 DYKDDDDK 标签蛋白的细胞系如 CHO-S、HEK293 等），用 PBS 洗涤一次，调整细胞浓度为 2×10⁶ – 1×10⁷ cells/mL，每管分装 100 µL（2×10⁵ – 1×10⁶ cells）。
二、固定与破膜（胞内染色必需）
由于 DYKDDDDK 标签通常融合在目的蛋白上，需进行胞内染色。以 Cyto-Fast™ Fix/Perm Buffer Set 为例：
1. 使用去离子水将 Cyto-Fast™ Perm Wash 溶液（10×）稀释至 1× 浓度。
2. 每管加入 150 µL Cyto-Fast™ Fix/Perm Solution，混匀，室温孵育 20 min。
3. 加入 1 mL 1× Cyto-Fast™ Perm Wash，350-500×g 离心 5 min，弃上清。重复洗涤一次。
三、抗体染色
用 1× Cyto-Fast™ Perm Wash 配制抗体工作液，每管加入 ≤0.125 µg MFG-01 APC 抗体，总体积 100 µL。室温避光孵育 20 min。
四、洗涤与重悬
加入 1 mL 1× Cyto-Fast™ Perm Wash 洗涤，350-500×g 离心 5 min，弃上清。加入 0.5-1 mL Cell Staining Buffer 或 PBS 洗涤一次，离心弃上清。将细胞重悬于 200-300 µL Cell Staining Buffer 或 PBS 中，上机检测。
对照类型 用途 空白对照（未染色） 调节电压 单染/单阳性对照（转染阳性细胞） 调节补偿 同型对照 消除背景染色干扰 FMO（荧光扣除）对照 确定设门准确性
检测结果示例
CHO-S cell expressing DYKDDDDK Tag protein（filled histogram）and blank CHO-S cell（open histogram）were fixed and permeabilized with Cyto-Fast™ Fix/Perm Buffer Set, then stained with APC anti-DYKDDDDK mAb（clone MFG-01）。
经 Cyto-Fast™ Fix/Perm Buffer Set 固定破膜后，MFG-01 APC 抗体可特异性识别 CHO-S 细胞中表达的 DYKDDDDK 标签蛋白，转染阳性细胞呈现明显的 APC 荧光信号右移，空白细胞背景信号低。
注意事项
1. 使用前快速离心抗体管，回收管壁上的液体。
2. 流式抗体使用浓度因样本而异，建议做滴定实验确定最适浓度。
3. APC 标记物对光敏感，染色和孵育过程请避光操作。
4. 本产品仅用于科研，不可用于体外诊断。
常见问题 FAQ
Q: MFG-01 克隆号有什么特点？
A: MFG-01 是针对 DYKDDDDK 标签序列筛选的单克隆抗体，特异性识别 DYKDDDDK 八肽序列，适用于流式细胞术检测转染/过表达细胞中的标签蛋白。
Q: 16-7021-12（25 µg）和 16-7021-15（100 µg）怎么选？
A: 两者抗体浓度均为 0.2 mg/mL，区别在于包装规格。25 µg 适合预实验或小规模检测，100 µg 适合常规使用。按 ≤0.125 µg/测试计算，25 µg 约可用 200 次，100 µg 约可用 800 次。
Q: APC 通道和哪些荧光素不冲突？
A: APC Ex/Em 651/660 nm，对应流式细胞仪的 APC 通道（FL4）。多色方案中可与 FITC（FL1）、PE（FL2）、PerCP/Cy5.5（FL3）等搭配使用，注意补偿调节。
Q: 需要做胞内染色吗？表面染色可以用吗？
A: DYKDDDDK 标签通常融合在目的蛋白内部或 C 端，推荐进行胞内染色（固定+破膜后检测）。如果标签位于蛋白 N 端且暴露在细胞表面，也可尝试表面染色，但需通过预实验验证。
Q: 可以用于人源或鼠源样本吗？
A: DYKDDDDK 是人工设计的外源标签序列，不存在于天然人源或鼠源蛋白中，因此本抗体适用于任何物种来源的转染/过表达细胞系（如 HEK293、CHO、NIH3T3 等），只要细胞表达了带 DYKDDDDK 标签的目的蛋白即可检测。
技术支持
NeoMab® 隶属信天翁生物科技（广州）有限公司，专注重组抗体与流式抗体研发。客服 400-090-1923 / service@gooniebio.com
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