FITC Mouse Anti-human CD19 Antibody(4G7)
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TL;DR:NeoMab 11-1019-12 FITC 标记小鼠抗人 CD19 单克隆抗体(4G7 克隆),特异性识别人 CD19 分子,标记 B 细胞(从 pro-B 到母细胞 B 细胞,浆细胞不表达)及滤泡树突状细胞;抗体浓度 0.2 mg/mL,推荐用量 5 µL/百万细胞或 5 µL/100 µL 全血;蓝光(488 nm)激发,发射波长 526 nm;适用于流式细胞术(Flow Cytometry)检测人 B 细胞;2-8℃ 避光保存,两年有效。
应用领域:B 细胞免疫表型分析、B 细胞发育与分化研究、B 细胞恶性肿瘤(CLL/ALL/DLBCL)免疫分型、自身免疫病 B 细胞监测、疫苗免疫应答中 B 细胞应答分析。
一、产品规格总表
参数 详情 产品名称 FITC Mouse Anti-human CD19 Antibody (4G7) 货号 11-1019-12(25 Tests,125 µL)/ 11-1019-15(100 Tests,500 µL) 克隆号 4G7 宿主 / 亚型 Mouse IgG1, κ 偶联物 FITC(异硫氰酸荧光素) 种属反应性 Human(人) 验证应用 Flow Cytometry(流式细胞术) 激发 / 发射波长 498 nm / 526 nm 激发激光器 Blue Laser(488 nm) 抗体浓度 0.2 mg/mL 推荐用量 5 µL / 百万细胞(100 µL 染色体积)或 5 µL / 100 µL 全血 保存条件 2-8℃ 避光保存,两年有效;冰袋运输 产品形态 液体
二、靶标背景 · CD19
CD19 是分子量约 95 kDa 的 I 型跨膜糖蛋白,别名 B4,属于免疫球蛋白超家族(IgSF)成员。CD19 由 CD19 基因编码,Gene ID: 930。CD19 是 B 细胞谱系最经典的表面标记物之一,从 pro-B 细胞阶段开始表达,贯穿 pre-B、immature B、mature B 到 blastoid B 细胞的整个发育过程,但在终末分化的浆细胞(plasma cell)表面不表达。
CD19 在 B 细胞表面与 CD21(CR2,补体受体 2)和 CD81(TAPA-1)形成四聚体复合物,作为 B 细胞受体(BCR)的共受体(co-receptor),显著增强 BCR 信号转导效率。CD19 胞内段含有多个酪氨酸磷酸化位点,可募集 Vav、PI3K、PLCγ2 等信号分子,参与 B 细胞的发育、活化和分化调控。
表达分布:CD19 特异性表达于 B 细胞谱系各阶段(pro-B → mature B),以及滤泡树突状细胞(FDC)。不表达于 T 细胞、NK 细胞、单核/巨噬细胞、粒细胞及浆细胞。外周血 B 细胞(CD19+)约占淋巴细胞总数的 5-15%。
别名:B4、CVID3
Gene ID:930
分布:B 细胞(pro-B 至 mature B 全阶段)、滤泡树突状细胞(FDC);浆细胞不表达
三、克隆号信息 · 4G7
4G7 是抗人 CD19 广泛使用的小鼠单克隆抗体克隆号,特异性识别 CD19 分子胞外段。4G7 克隆在流式细胞术中用于 B 细胞鉴定已有丰富应用历史,文献引用广泛,与临床 B 细胞免疫分型方案高度兼容。
与其他 CD19 克隆的比较:常见 CD19 克隆还包括 HIB19、SJ25C1、B4 等。4G7 的优势在于:① 识别表位稳定,批间一致性好;② 非特异性背景染色低;③ 与多种荧光素偶联兼容,适合多色 Panel。HIB19 在部分文献中表现出更高的荧光信号强度,但 4G7 在 B 细胞恶性肿瘤分型中应用更为广泛。
典型应用:外周血/骨髓 B 细胞总量鉴定、B 细胞恶性肿瘤免疫分型(联合 CD5/CD10/CD20/CD23 等)、CD19-CAR-T 治疗后 B 细胞监测、自身免疫病(SLE/RA)B 细胞亚群分析、疫苗免疫应答中 B 细胞应答评估。
四、荧光素信息 · FITC
FITC(Fluorescein Isothiocyanate,异硫氰酸荧光素)是流式细胞术中经典的绿色荧光染料,激发峰 498 nm、发射峰 526 nm,由 488 nm 蓝光激光器激发。
光谱特征:
参数 数值 激发波长 498 nm 发射波长 526 nm(绿色) 激光器 Blue Laser(488 nm) 检测通道 FITC-A / FL1(530/30 nm 滤光片) Stokes 位移 ~28 nm
多色 Panel 搭配建议:FITC 发射光谱较宽(526 nm),与 PE(578 nm)存在光谱溢出,需做荧光补偿。B 细胞检测常见搭配:
• FITC-CD19 + PE-CD5 → B-CLL 分型(CD19+CD5+ 提示 CLL/MCL)
• FITC-CD19 + PE-CD10 → 滤泡性淋巴瘤分型(CD19+CD10+ 提示 FL)
• FITC-CD19 + PE-CD20 + PerCP-CD3 → B/T 细胞分型 + CD20 表达评估
• FITC-CD19 + PE-CD23 → CLL vs MCL 鉴别(CLL: CD23+ / MCL: CD23-)
• FITC-CD19 + APC-CD38 + PE-CD27 → Memory B 细胞亚群分析注意事项:FITC 的荧光强度受 pH 影响(pH < 6.5 时荧光显著减弱),确保染色缓冲液 pH 在 7.0-7.4 范围内。FITC 对光敏感,操作过程中注意避光。
五、流式染色 Protocol
所需试剂:
• NF0003 细胞染色缓冲液(PBS + 0.5-1% BSA + 0.05% NaN₃)
• NF0004-5 7-AAD 溶液(死细胞排除)
• Fc 受体封闭试剂(含单核/巨噬/B/NK 细胞样本推荐添加)
• 红细胞裂解液(全血或含红细胞组织样本选做)
操作步骤:
Step 1 · 制备单细胞悬液
收集所需组织(如脾脏、淋巴结、骨髓),在细胞染色缓冲液(NF0003)中制备单细胞悬液。如果是体外培养的细胞,用染色缓冲液洗涤一次并重悬。调整细胞浓度为 5-10 × 10⁶ cells/mL,分装 100 µL/tube(5-10 × 10⁵ cells/tube)。
Step 2 · Fc 受体封闭
B 细胞表面表达 Fc 受体,会与抗体 Fc 段非特异性结合,影响实验结果。推荐使用 Fc 受体封闭剂,根据小鼠样本或人样本选用合适的 Fc 受体封闭试剂,每管加入 5 µL,室温孵育 5-10 min,不用洗涤。
Step 3 · 抗体染色
每管加入 5 µL FITC Anti-human CD19(4G7)抗体,轻柔混匀,冰上避光孵育 20-30 min。不同样本可做滴定实验确定最适浓度。
Step 4 · 洗涤
用 1 mL 细胞染色缓冲液洗涤 1 次。
Step 5 · 7-AAD 活性染料染色
重悬细胞于 0.1 mL 染色缓冲液,每百万细胞加入 5 µL(0.25 µg)7-AAD Solution(NF0004-5),用于排除死细胞。
Step 6 · 孵育
冰上避光孵育 5-10 min。
Step 7 · 洗涤
用 1 mL 细胞染色缓冲液洗涤 1 次。
Step 8 · 上机检测
细胞重悬于 300-500 µL 细胞染色缓冲液中,上机测试。如不能及时测试,保存于 4℃ 并于 4 小时内完成检测。FITC 通道选择 FL1(530/30 nm)。
(选做)红细胞裂解:对于全血或含红细胞的组织样本,选用合适的红细胞裂解液并按说明书操作。一般建议先染色再裂红。
注意事项:使用前快速离心抗体管回收管壁上的抗体;不同样本建议做滴定实验确定最适浓度;本产品仅用于科研,请勿用于体外诊断。
六、对照设置指南
对照类型 用途与说明 空白对照(未染色) 评估细胞自发荧光,用于调节 PMT 电压 单染/单阳性对照 多色 Panel 中用于调节荧光补偿,每种荧光素各设一管 同型对照 FITC 标记的 Mouse IgG1, κ 同型抗体,消除非特异性背景染色。4G7 为 Mouse IgG1, κ 亚型,同型对照的宿主、亚型和偶联物需完全一致 FMO 对照(Fluorescence Minus One) 多色 Panel 中去除某一种荧光素,用于准确设门,特别是 CD19 弱表达群体(如活化后 CD19 下调的 B 细胞)
提示:CD19 在成熟 B 细胞上表达丰度高,阳性峰与阴性峰分离明显,基础鉴定可不设同型对照;但若用于 CD19 弱表达群体(如 pro-B 细胞、CAR-T 治疗后 CD19 低表达 B 细胞),同型对照推荐设置。
七、质量数据与参考文献
每批产品均经过严格质控,流式细胞术验证对人 CD19+ B 细胞的特异性染色性能,确认抗体效价、荧光素偶联效率及无菌性。批间一致性保证实验可重复性。
参考文献:
1. Tedder TF, et al. J Immunol. 1984;133(2):712-718.(CD19/B4 分子鉴定与表征)
2. Zhou LJ, et al. Blood. 2003;101(7):2543-2552.(CD19 作为 BCR 共受体的信号调控)
3. Uchida J, et al. J Clin Invest. 2004;114(8):1112-1121.(CD19 在自身免疫病中的治疗靶点价值)
4. Staudt LM. Nat Rev Immunol. 2003;3(12):965-970.(B 细胞恶性肿瘤中 CD19 的表达与临床意义)
5. Maude SL, et al. N Engl J Med. 2015;373(11):1040-1047.(CD19-CAR-T 治疗 B-ALL 的临床疗效)
八、相关产品
同靶标 · 不同荧光素(人 CD19,4G7 克隆):
• 10-1019-1 Biotin Mouse Anti-human CD19 (4G7) — 生物素标记,搭配链霉亲和素荧光素使用
• 26-1019-1 AF647 Mouse Anti-human CD19 (4G7) — AF647 标记,远红荧光,Ex/Em 650/668 nm
小鼠 CD19 检测:
• 11-2019-1 FITC Rat Anti-mouse CD19 (6D5) — Rat 抗 Mouse CD19,FITC 标记
• 26-2019-1 AF647 Rat Anti-mouse CD19 (6D5) — Rat 抗 Mouse CD19,AF647 标记
配套试剂:
• NF0003 细胞染色缓冲液 — PBS + BSA + NaN₃,流式染色专用
• NF0004-5 7-AAD 溶液 — 死细胞排除染料
九、常见问题 · FAQ
Q: 11-1019-12 的同型对照选什么?
A: 选择 FITC 标记的 Mouse IgG1, κ 同型抗体。4G7 是 Mouse IgG1, κ 亚型,同型对照的宿主、亚型和偶联物需完全一致,以消除 Fc 段非特异性结合和 FITC 自发荧光的干扰。
Q: CD19 在哪些细胞上表达?浆细胞表达 CD19 吗?
A: CD19 从 pro-B 到 mature B 细胞全阶段表达,滤泡树突状细胞(FDC)也有表达。但浆细胞(plasma cell)不表达 CD19——这是区分 B 细胞和浆细胞的关键标记之一。浆细胞标志物应选 CD138(Syndecan-1)或 CD38。
Q: 4G7 和 HIB19 克隆有什么区别?
A: 两者都靶向人 CD19,但识别的表位不同。4G7 在 B 细胞恶性肿瘤分型中应用更广泛,文献引用丰富,批间一致性好;HIB19 在部分文献中表现出更高的荧光信号强度。如果已有成熟的 Panel 方案使用 4G7,建议保持一致;新建 Panel 两者均可,4G7 在临床分型方案中更常见。
Q: 11-1019-12 可以用于小鼠 B 细胞检测吗?
A: 不可以。4G7 克隆特异性识别人 CD19,不交叉反应小鼠 CD19。小鼠 B 细胞检测请使用 Rat 抗 Mouse CD19 抗体,如 11-2019-1 FITC Rat Anti-mouse CD19 (6D5)。
Q: 外周血中 B 细胞的正常比例是多少?
A: 健康成人外周血淋巴细胞中,CD19+ B 细胞通常占 5-15%(绝对计数约 100-500 个/µL)。B 细胞比例异常升高可见于 B-CLL、B-ALL 等 B 细胞恶性肿瘤;比例降低可见于免疫缺陷(如 CVID)、利妥昔单抗治疗后等。
十、技术支持
NeoMab 隶属信天翁生物科技(广州)有限公司,专注于流式抗体和免疫学试剂研发。
• 客服电话:400-090-1923
• 技术支持邮箱:service@gooniebio.com
• 公司官网:www.gooniebio.com
• 地址:广州市黄埔区瑞和路39号纳金科技园
页面总结:NeoMab 11-1019-12 FITC Mouse Anti-human CD19 Antibody(4G7),特异性识别人 CD19 分子(95 kDa I 型跨膜糖蛋白),标记 B 细胞(pro-B 至 mature B 全阶段,浆细胞不表达),0.2 mg/mL 抗体浓度,5 µL/百万细胞推荐用量,Mouse IgG1,κ 亚型,2-8℃ 避光保存两年有效,广泛用于 B 细胞免疫表型分析、B 细胞恶性肿瘤免疫分型、CD19-CAR-T 疗效监测、自身免疫病 B 细胞研究等科研领域。
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产品组成:
货号/规格 组分名称 体积 11-1019-12 25T FITC Mouse Anti-human CD19 Antibody(4G7) 125 μL 11-1019-15 100T FITC Mouse Anti-human CD19 Antibody(4G7) 500 μL 保存:2-8℃避光保存。冰袋运输。
关键词
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