FITC Rat Anti-mouse CD4 Antibody（GK1.5）
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TL;DR：NeoMab 11-2004-12 FITC 标记大鼠抗小鼠 CD4 单克隆抗体（GK1.5 克隆），特异性识别小鼠 CD4 分子，标记辅助性 T 细胞（Th 细胞）及胸腺细胞；抗体浓度 0.5 mg/mL，推荐用量 ≤0.25 µg/百万细胞；蓝光（488 nm）激发，发射波长 526 nm；适用于流式细胞术（Flow Cytometry）检测小鼠 T 细胞亚群；2-8℃ 避光保存，两年有效。
应用领域：小鼠 T 细胞亚群分型（CD4+/CD8+）、免疫应答 Th1/Th2/Th17 极化分析、自身免疫病模型（EAE/CIA）T 细胞监测、肿瘤微环境免疫浸润分析、疫苗免疫原性评估、免疫缺陷模型（如 SCID/NOD）T 细胞重建评估。
一、产品规格总表
参数 详情 产品名称 FITC Rat Anti-mouse CD4 Antibody (GK1.5) 货号 11-2004-12（25 µg，50 µL）/ 11-2004-15（100 µg，200 µL） 克隆号 GK1.5 宿主 / 亚型 Rat IgG2b, κ 偶联物 FITC（异硫氰酸荧光素） 种属反应性 Mouse（小鼠） 验证应用 Flow Cytometry（流式细胞术） 激发 / 发射波长 498 nm / 526 nm 激发激光器 Blue Laser（488 nm） 抗体浓度 0.5 mg/mL 推荐用量 ≤ 0.25 µg / 百万细胞（100 µL 染色体积） 保存条件 2-8℃ 避光保存，两年有效；冰袋运输
二、靶标背景 · 小鼠 CD4
小鼠 CD4 是分子量约 55 kDa 的糖蛋白，又称 L3T4 或 T4，属于免疫球蛋白超家族（IgSF）成员，由 Cd4 基因编码，Gene ID: 12504。CD4 主要表达于大多数胸腺细胞（thymocytes）、辅助性 T 细胞（Th 细胞）亚群，以及弱表达于巨噬细胞和树突状细胞。
CD4 在 T 细胞活化及胸腺分化过程中作为 TCR 的共受体（co-receptor），通过结合 MHC II 类分子并与蛋白酪氨酸激酶 lck 关联，增强 TCR 信号转导。CD4+ T 细胞是适应性免疫的核心调控者，可进一步分化为 Th1、Th2、Th17、Treg、Tfh 等多种功能亚群，在抗感染、抗肿瘤及自身免疫病中发挥关键作用。
表达分布：胸腺细胞、辅助性 T 细胞（CD3+CD8-）、部分 NKT 细胞；弱表达于巨噬细胞和树突状细胞。小鼠脾脏淋巴细胞中 CD4+ T 细胞约占 T 细胞总数的 60-65%。
别名：L3T4、T4
Gene ID：12504（Mouse）
分布：辅助性 T 细胞、胸腺细胞；弱表达于巨噬细胞、树突状细胞
三、克隆号信息 · GK1.5
GK1.5 是抗小鼠 CD4 最经典的大鼠单克隆抗体克隆号之一，在小鼠免疫学研究中应用超过 40 年，文献引用极为丰富。GK1.5 特异性识别小鼠 CD4 分子，广泛用于流式细胞术 CD4+ T 细胞鉴定和分型。
典型应用：小鼠脾脏/淋巴结/外周血 T 细胞亚群分型（CD4 vs CD8）、Th 细胞极化分析（Th1/Th2/Th17/Treg）、肿瘤微环境免疫浸润评估、自身免疫病模型（EAE、CIA、NOD 糖尿病）T 细胞监测、疫苗免疫应答评估。
四、荧光素信息 · FITC
FITC（Fluorescein Isothiocyanate，异硫氰酸荧光素）是流式细胞术中经典的绿色荧光染料，激发峰 498 nm、发射峰 526 nm，由 488 nm 蓝光激光器激发。
光谱特征：
参数 数值 激发波长 498 nm 发射波长 526 nm（绿色） 激光器 Blue Laser（488 nm） 检测通道 FITC-A / FL1（530/30 nm 滤光片） Stokes 位移 ~28 nm
小鼠免疫 Panel 搭配建议：FITC 发射光谱较宽（526 nm），与 PE（578 nm）存在光谱溢出，需做荧光补偿。小鼠 T 细胞分型常见搭配：
• FITC-CD4 + PE-CD8 → 经典 T 细胞亚群分型（CD4+ vs CD8+）
• FITC-CD4 + PE-CD3 + PerCP-B220 → T/B 细胞分型 + Th 细胞鉴定
• FITC-CD4 + PE-CD62L + APC-CD44 → Memory T 细胞亚群分析
• FITC-CD4 + PE-IFN-γ + APC-IL-4 → Th1/Th2 胞内因子分型
• FITC-CD4 + PE-FoxP3 → 调节性 T 细胞（Treg）鉴定注意事项：FITC 的荧光强度受 pH 影响（pH < 6.5 时荧光显著减弱），确保染色缓冲液 pH 在 7.0-7.4 范围内。FITC 对光敏感，操作过程中注意避光。
五、流式染色 Protocol
所需试剂：
• NF0003 细胞染色缓冲液（PBS + 0.5-1% BSA + 0.05% NaN₃）
• NF0004-5 7-AAD 溶液（死细胞排除）
• Fc 受体封闭试剂（含单核/巨噬/B/NK 细胞样本推荐添加）
• 红细胞裂解液（全血或含红细胞组织样本选做）
操作步骤：
Step 1 · 制备单细胞悬液
收集所需组织（如脾脏、淋巴结、胸腺、骨髓），在细胞染色缓冲液（NF0003）中制备单细胞悬液。如果是体外培养的细胞，用染色缓冲液洗涤一次并重悬。调整细胞浓度为 5-10 × 10⁶ cells/mL，分装 100 µL/tube（5-10 × 10⁵ cells/tube）。
Step 2 · （选做）红细胞裂解
对于全血或含红细胞的组织样本，选用合适的红细胞裂解液并按说明书操作。裂解后需将红细胞裂解液去除干净，用细胞染色缓冲液至少洗涤 2 次并重悬。调整细胞浓度为 5-10 × 10⁶ cells/mL，分装 100 µL/tube。
Step 3 · Fc 受体封闭
巨噬细胞、单核细胞、粒细胞、B 细胞、树突状细胞等表面表达 Fc 受体，会与抗体 Fc 段非特异性结合。推荐使用 Fc 受体封闭试剂，根据小鼠样本选用合适试剂，每管加入 5 µL，室温孵育 5-10 min，不用洗涤。
Step 4 · 抗体染色
每管加入流式抗体（按照 ≤ 0.25 µg/百万细胞 in 100 µL volume），轻轻混匀，冰上避光孵育 20-30 min。不同样本建议做滴定实验确定最适浓度。
Step 5 · 洗涤
用 1 mL 细胞染色缓冲液洗涤 1 次。
Step 6 · 7-AAD 活性染料染色
重悬细胞于 0.1 mL 染色缓冲液，每百万细胞加入 5 µL（0.25 µg）7-AAD Solution（NF0004-5），用于排除死细胞。
Step 7 · 孵育
冰上避光孵育 5-10 min。
Step 8 · 洗涤
用 1 mL 细胞染色缓冲液洗涤 1 次。
Step 9 · 上机检测
细胞重悬于 300-500 µL 细胞染色缓冲液中，上机测试。如不能及时测试，保存于 4℃ 并于 4 小时内完成检测。FITC 通道选择 FL1（530/30 nm）。
注意事项：使用前快速离心抗体管回收管壁上的抗体；不同样本建议做滴定实验确定最适浓度；红细胞裂解一般建议先染色再裂红；本产品仅用于科研，请勿用于体外诊断。
六、对照设置指南
对照类型 用途与说明 空白对照（未染色） 评估细胞自发荧光，用于调节 PMT 电压 单染/单阳性对照 多色 Panel 中用于调节荧光补偿，每种荧光素各设一管 同型对照 FITC 标记的 Rat IgG2b, κ 同型抗体，消除非特异性背景染色。GK1.5 为 Rat IgG2b, κ 亚型，同型对照的宿主、亚型和偶联物需完全一致 FMO 对照（Fluorescence Minus One） 多色 Panel 中去除某一种荧光素，用于准确设门，特别是 CD4 弱表达群体
提示：CD4 在小鼠 T 细胞上表达丰度高（阳性峰与阴性峰分离明显），基础分型可不设同型对照；但若用于胞内染色（如 FoxP3）或 CD4 弱表达群体（如胸腺 double-positive 细胞），同型对照推荐设置。
七、质量数据与参考文献
每批产品均经过严格质控，流式细胞术验证对小鼠 CD4+ T 细胞的特异性染色性能，确认抗体效价、荧光素偶联效率及无菌性。批间一致性保证实验可重复性。
流式染色结果示例：C57BL/6 小鼠脾细胞经 CD4（GK1.5）FITC 染色（填充直方图）vs 阴性对照（开放直方图），可在 FL1 通道检测到明显的 CD4+ T 细胞群。
参考文献：
1. Dialynas DP, et al. Immunol Rev. 1983;74:29-56.（GK1.5 克隆的建立与小鼠 CD4 分子鉴定）
2. Swain SL. Immunol Rev. 1983;74:129-142.（CD4 作为 MHC II 类限制 T 细胞的共受体）
3. Gajewski TF, et al. Nat Rev Immunol. 2011;11(3):201-212.（Th 细胞亚群分化与功能综述）
4. Zhu J, et al. Annu Rev Immunol. 2010;28:445-489.（CD4+ T 细胞命运决定的分子机制）
5. Sakaguchi S, et al. Nat Rev Immunol. 2008;8(8):523-534.（CD4+CD25+FoxP3+ Treg 细胞生物学）
八、相关产品
同靶标 · 不同荧光素（小鼠 CD4，GK1.5 克隆）：
• 12-2004-1 PE Rat Anti-mouse CD4 (GK1.5) — PE 标记，Ex/Em 565/578 nm
• 16-2004-1 APC Rat Anti-mouse CD4 (GK1.5) — APC 标记，Ex/Em 650/660 nm
配套试剂：
• NF0003 细胞染色缓冲液 — PBS + BSA + NaN₃，流式染色专用
• NF0004-5 7-AAD 溶液 — 死细胞排除染料
九、常见问题 · FAQ
Q: 11-2004-12 的同型对照选什么？
A: 选择 FITC 标记的 Rat IgG2b, κ 同型抗体。GK1.5 是 Rat IgG2b, κ 亚型，同型对照的宿主、亚型和偶联物需完全一致。
Q: GK1.5 和 RM4-5 克隆有什么区别？
A: 两者都是大鼠抗小鼠 CD4 单克隆抗体，均特异性识别小鼠 CD4。主要区别：GK1.5 具有 CD4 阻断活性（可干扰 CD4 与 MHC II 的相互作用），不适用于体内功能性实验；RM4-5 阻断活性较弱，更适合体内实验。体外流式检测两者均可，已有成熟 Panel 使用 GK1.5 的建议保持一致。
Q: 小鼠 CD4 和人 CD4 有什么区别？可以用人 CD4 抗体检小鼠细胞吗？
A: 小鼠 CD4 和人 CD4 虽然功能相似（都是 MHC II 共受体），但分子结构不同，抗人 CD4 抗体不能交叉反应检测小鼠 CD4。小鼠 CD4 必须使用抗小鼠 CD4 抗体（如 GK1.5 或 RM4-5），人 CD4 则使用抗人 CD4 抗体（如 OKT4，即 11-1004-1）。
Q: 小鼠脾脏中 CD4+ T 细胞正常比例是多少？
A: C57BL/6 小鼠脾脏淋巴细胞中，CD4+ T 细胞约占 T 细胞总数的 60-65%（CD4:CD8 比值约 1.5-2:1）。BALB/c 小鼠比例略低，约 55-60%。外周血中比例与脾脏类似。CD4/CD8 比值异常（升高或降低）可提示免疫状态变化。
Q: 做 Treg 分型怎么搭配？
A: 小鼠 Treg 经典鉴定 Panel 为：FITC-CD4 + PE-CD25 + APC-FoxP3（需核内染色）。GK1.5 FITC 标记 CD4 用于圈定 Th 细胞，CD25 和 FoxP3 双阳性即为 Treg。注意 FoxP3 需核内染色，需使用专用核内固定/破膜试剂盒。
十、技术支持
NeoMab 隶属信天翁生物科技（广州）有限公司，专注于流式抗体和免疫学试剂研发。
• 客服电话：400-090-1923
• 技术支持邮箱：service@gooniebio.com
• 公司官网：www.gooniebio.com
• 地址：广州市黄埔区瑞和路39号纳金科技园
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保存：2-8℃避光保存。冰袋运输。
关键词
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