如何评估起始样本并计算细胞分选后的得率

发布时间:2026-07-06

详解细胞分选得率计算公式，涵盖起始样本评估、细胞计数方法、流式纯度鉴定与表位占据等关键环节，助您客观评估FiniGet分必得®无柱阴性分选效率。

在每一次细胞分选实验中，有一个环节看似细微却关乎全局——那就是在启动分选之前，有意识地从起始样本中预留出一小部分细胞。这个简单的操作，为您后续评估整个实验的成败提供了最关键的参照系。通过对比分选前后的细胞群体变化，您不仅能知道获得了多少目标细胞，更能客观评判这次细胞分离操作的效率与质量。

不同来源的组织样本（如脾脏、淋巴结、肿瘤组织或外周血），其免疫细胞亚群的基线比例本就存在天然差异。即便是同一种组织，来自正常个体、患病模型或转基因动物的样本，目标细胞的占比也可能相差悬殊。因此，依赖文献报道的参考值只能提供大致预期，唯有通过实验自身的平行对照，才能获得最真实的判断依据。

一、细胞得率：衡量分选效率的量化标尺

计算细胞分选后的得率，是一个简便而有力的质控工具。它综合反映了分选操作在"收获量"和"纯度"两个维度上的表现。要完成这一计算，您需要准确获取以下四个核心数据：

1. 分选前起始样本中的细胞总数（即总细胞计数）

2. 目标细胞在起始样本中所占的比率（即起始纯度）

3. 分选后所得细胞的总数（即富集产物的细胞量）

4. 分选后目标细胞的纯度（即终产物纯度）

获得上述数据后，请按照以下公式计算细胞分选得率：

得率 = [（分选后细胞总数）×（分选后目标细胞纯度）] / [（分选前细胞总数）×（分选前目标细胞比率）] × 100%

这个百分比直观地告诉您：起始样本中存在的目标细胞，有多少被成功保留到了最终产物中。对于FiniGet分必得®无柱阴性分选试剂盒（信天翁生物）而言，由于采用免疫磁珠分选的阴性富集策略——即标记并去除非目标细胞，目标细胞本身未经磁珠标记——其得率通常保持较高水平，且分选后的细胞更接近天然状态，便于直接用于下游功能实验。

操作建议：为简化实验流程，您可以在实验结束时，将预留的起始样本与分选后的富集样本一并送检（如流式细胞术分析）。这样既避免了中途打断实验，也能保证两组数据的检测条件一致。

二、细胞总数：确保计数方法准确可靠

起始样本和富集样本中的细胞总数，需要通过规范的细胞计数来获得。理想情况下，建议同时评估有核细胞总数和细胞活率，但单纯计算得率时，有核细胞总数数据已足够使用。

需要特别注意的是，如果使用自动化细胞计数仪，务必确认仪器参数设置正确，确保仅计数有核白细胞，将红细胞碎片和无细胞杂质排除在外。脾脏、骨髓等组织中红细胞含量丰富，若计数时将其纳入，会严重高估样本中的"细胞总量"，进而导致得率计算结果严重失真。对于通过密度梯度离心（如PBMC分离）获得的样本，此问题相对较轻，但对于全脾脏制备的单细胞悬液，务必格外留意。

三、目标细胞纯度：流式分析的注意事项

起始样本中目标细胞的比率，以及分选后产物的最终纯度，通常通过流式细胞术进行鉴定。FiniGet分必得®无柱阴性分选试剂盒的产品说明书会针对不同细胞亚型（如T细胞分选、B细胞分选等）提供推荐的抗体克隆号和染色方案。

在实际操作中，有一类技术细节尤其值得关注——即"表位占据"问题。某些阳性分选策略（即直接标记目标细胞的方法）使用的分选抗体可能与后续流式检测抗体竞争结合同一表位，导致流式检测到的阳性率显著低于真实值，从而低估纯度或得率。对于阴性分选体系（如FiniGet分必得®无柱阴性分选试剂盒），由于目标细胞未被任何抗体或磁珠标记，这一困扰可有效避免，但实验者仍需遵循说明书建议的染色方案，确保染色抗体克隆与检测仪器设置相匹配。

此外，无论使用何种分选策略，在流式分析时都建议对活细胞进行设门。死细胞可通过活力染料排除，这能有效避免死细胞带来的非特异性染色干扰，使纯度评估更为精准，进而让得率的计算真正反映功能性活细胞的回收情况。