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RNA数据不好不要丢，还能救
发布时间:2024-06-20
A260/A280、A260/A230比值偏低，主要的原因就是酚残留，别急着把样本丢弃，大可不必从头再来，下面
A260/A280、A260/A230比值偏低，主要的原因就是酚残留，别急着把样本丢弃，大可不必从头再来，下面教大家如何重新洗涤沉淀，得出理想的RNA纯度。
方法一：
如果是用Trizol提取RNA，最后得出来的OD值比较低，可以重新吸附、洗涤，注意是直接洗涤两次，之后离心时可以两次将 EP 管置于不同的方向，便于溶液中的各个部分都能得到充分的洗涤。
方法二：
加入0.1倍体积的3M sodium acetate以及3倍体积的冰乙醇，将混合物置于-80℃下冷藏过夜，第二天离心，之后再使用75%的冰乙醇洗涤沉淀物。
具体操作步骤：
①在不纯的RNA样本中加入0.1倍体积的3M 醋酸钠、2.5~3倍体积冰上预冷的无水乙醇（100%），旋涡充分混合。
②在-20℃下沉淀1小时或过夜，又或者在-80℃下沉淀一小时（如果RNA量很少，过夜放置可以产生更多沉淀）。
③4℃下最高速离心（13000rpm）30分钟
④用0.5 mL冰上预冷的75%乙醇洗涤RNA沉淀两次，每次在4℃下离心10分钟
⑤去除乙醇，吸走大部分乙醇后，可以快速离心（最高速度离心10秒），尽可能去除剩余的乙醇。
⑥风干沉淀并重悬于适当体积的无核酸酶水中。
如果RNA量较少，可以添加糖原帮助沉淀。在沉淀之前，在样本中加入1 μL 20mg/mL的糖原。
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