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qPCR用的是DEPC水还是ddH2O？稀释cDNA用哪种？别搞错了
发布时间:2025-10-17
一句话总结，在分子生物学实验室，养成“凡是涉及核酸，尤其是RNA的操作，一律使用无酶水”的习惯，是最稳妥、最专业的做法。
定义：经过两次蒸馏得到的纯度很高的水。
特点：不含离子、杂质和有机物，但可能含有RNase（核糖核酸酶）。
风险：RNase非常稳定，无处不在（皮肤、灰尘、器皿上都有），它会降解RNA。
定义：用DEPC（焦碳酸二乙酯）处理过的ddH₂O。
特点：不含RNase，DEPC能与RNase的活性基团反应，从而灭活RNase。
注意：DEPC本身有毒性，且会干扰生化反应。因此，商业购买的或自行处理的DEPC水，在灭活RNase后，必须通过高温高压灭菌来分解残留的DEPC，才能安全使用。
建议用DEPC水
从RNA提取、反转录到qPCR，都应该在无RNase的环境中进行。使用DEPC水可以最大限度地避免意外引入RNase。
建议用DEPC水
一方面，商业化的qPCR Mix都是无核酸酶的。用DEPC水去稀释和配制体系，能保证整个反应环境的纯洁，避免因水质问题导致酶失活或非特异性扩增。
另一方面，引物（尤其是基因特异性引物）是单链DNA寡核苷酸，虽然DNA酶（DNase）不像RNase那样顽固和普遍，但使用无酶水可以避免潜在的外源核酸酶污染风险。
一句话总结，在分子生物学实验室，养成“凡是涉及核酸，尤其是RNA的操作，一律使用无酶水”的习惯，是最稳妥、最专业的做法。
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