提取细胞、动物组织、血液的RNA要注意什么？高质量提取试剂盒包邮试用
发布时间:2024-07-25
在分子生物学研究中，RNA的提取是至关重要的一步，它直接影响到后续实验结果的准确性和可靠性。
对于不同类型的样本，如细胞、动物组织和血液，RNA提取过程中需要关注的细节和注意事项也各不相同。
动物组织
1、组织选取与保存：
因为RNA极易降解，所以首选新鲜组织进行RNA提取，同时保证组织块的清洁，没有血液、污物、粘液、食物、粪便等。
如果使用非新鲜组织，那么样本最好选择在-80℃冰箱或液氮中妥善保存且保存时间在三个月内的。
尽量避免组织的反复冻融，因为这同样会加速RNA的降解。
2、样本处理：
剪取组织时，避免组织长时间暴露于室温，应在冰盒上迅速操作，减少RNA降解的风险。
使用干净且经过消毒的剪刀和镊子剪取组织样本，确保从组织中央部位或新鲜切口处获取。
将剪下的组织充分剪碎，并立即放入无RNA酶的EP管中，加入适量的裂解液。确保剪碎的组织与裂解液充分接触，为后续匀浆做好准备。
3、组织量与裂解液匹配：
根据组织类型和成分调整剪取的组织量。对于含有大量蛋白、脂肪或紧密纤维组织的样本，比如肝脏，应适当减少组织量。
4、匀浆方法：
在条件允许的情况下，使用高通量组织匀浆机进行匀浆，以获得更好的匀浆效果。如果没有该设备，可以采用其他方法，但需要注意避免RNA的降解和损失，研磨不彻底会影响RNA的得率和质量。
5、RNA保存与操作：
提取后的RNA应立即置于冰上，并在整个实验过程中保持低温状态，以防止RNA的降解。
避免RNA长时间暴露于空气中，使用无RNA酶的试剂和耗材，以防止RNA的污染。
细胞
1、悬浮细胞：
悬浮细胞经离心后，应弃去培养基，并以无菌PBS轻柔洗涤一至两次，以去除残留物。随后，利用适量PBS重新悬浮细胞，确保其均匀分散。
不要没有重悬，直接加裂解液，可能会导致细胞表层的组蛋白释放并包裹沉淀细胞，阻碍裂解液的有效渗透，使得细胞裂解不充分，进而影响RNA的提取纯度和产量。
2、半贴壁或贴壁不紧的细胞：
对于半贴壁或贴壁不紧密的细胞，处理时首先需弃去培养基，随后用PBS清洗一至两次以去除残留物。接着，利用吸管或移液枪吸取适量PBS，轻柔吹打培养皿，使细胞从皿底脱落。
随后，将含细胞的PBS悬液转移至无RNA酶的EP管中，并加入裂解液进行细胞裂解和RNA提取。
这一过程中，确保操作轻柔且避免细胞损失，以保证RNA提取的效率和纯度。
3、贴壁细胞：
对于贴壁细胞的处理，首先需使用胰酶进行消化，以便于细胞从培养皿底部分离。随后，将消化后的细胞悬液收集至无RNA酶的EP管中，并进行离心操作去掉上清液中的胰酶和其他杂质。
确保去掉多余的胰酶，接着，用PBS对细胞进行轻柔的清洗一至两次。清洗完成后，用适量的PBS重新悬浮细胞，确保细胞均匀分散。最后，按照既定的提取步骤，继续进行RNA的提取工作。
整个过程中，需保持操作的准确性和轻柔性，以确保细胞的完整性和RNA的提取效率。
血液
血液跟普通的细胞样本不同，其中含有的血浆、红细胞，使得样本成分更加复杂， 提取的难度也相对较大。
全血样本含有众多红细胞，而红细胞中RNA数量少，因此在提取 RNA 之前通常需要先去掉红细胞。
RNA 容易被血液中的酶降解，因此在采集和保存全血样本时需要注意防止 RNA 的降解。
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