Demo案例｜小鼠 Naive CD8+ T 本底仅 1.5%，如何分选到 92% 纯度？
发布时间:2026-10-23
做小鼠 T 细胞功能实验的人，多半踩过同一个坑：脾脏单细胞悬液里 Naive CD8+ T 细胞的天然占比很低，直接拿原始细胞做共培养或激活实验，目标细胞太少，数据很难稳定重复；分选方案稍微不稳，又容易混进效应 T、记忆 T 等杂亚群，表型一杂，后面的功能实验基本白做。
本次实验我们来到中山大学给友友做上门demo，这次 Demo 的样本更极端：小鼠脾脏原代单细胞悬液，目标细胞 Naive CD8+ T（CD3+CD8+CD44lowCD62Lhigh）的本底占比只有 1.5%。友友是初次独立做磁珠分选，对整套流程和质控要点还不熟，申请了上门技术支持；下游计划开展 Naive CD8+ T 与巨噬细胞共培养，对细胞品质要求不低——不能被提前激活、无磁珠残留、活率高，还要保住 CD44low CD62Lhigh 的初始表型。
分选结果：目标细胞本底 1.5%，分选后纯度 92%，活率 99%。
本次为单样本负向富集 Demo：以分选前细胞作为基线对照，分选收获细胞为富集组，流式检测纯度、表型与活率，收获细胞直接进入下游体外共培养体系。
| 项目 | 内容 |
|---|---|
| 样本来源 | 小鼠脾脏原代单细胞悬液 |
| 起始细胞量 | 1×108 cells，起始活性 90% |
| 目标细胞 | Naive CD8+ T（CD3+CD8+CD44lowCD62Lhigh） |
| 目标细胞本底占比 | 1.5% |
| 分组设计 | 单样本负向富集；分选前细胞为基线对照，分选收获细胞为富集组 |
| 使用产品 | FiniGet 分必得® 小鼠 Naive CD8+ T 细胞分选试剂盒 130-6013（无柱负选） |
配套耗材：5 mL 流式管、70 μm 细胞筛、配套磁力架、预冷分选缓冲液。
1. 样本制备：小鼠脾脏经 70 μm 筛网研磨制备单细胞悬液；500 g 离心 5 min 弃上清，缓冲液重悬，计数有核细胞数量，确认细胞浓度 1×108/mL，镜检细胞状态。
2. 抗体孵育：用试剂盒配套分选缓冲液调整细胞体系，按说明书比例加入阴性抗体混合液，轻柔吹打混匀，孵育 10 min。
3. 磁珠孵育：加入分选磁珠，轻柔混匀，孵育 10 min；孵育结束后补充分选缓冲液至 2.5 mL，轻柔混匀。
4. 无柱负选分离：将离心管放入配套磁力架，静置 2.5 min；缓慢吸取上清（目标 Naive CD8+ T 细胞组分）转移至新离心管，带磁珠标记的杂细胞吸附于管壁舍弃。
5. 细胞洗涤收集：500 g 离心 5 min，弃上清，收集细胞沉淀。
6. 流式质控：缓冲液重悬沉淀、取样，用自备流式抗体染色上机，鉴定 Naive CD8+ T 纯度与 CD44/CD62L 表型；台盼蓝检测细胞活率；肉眼观察沉淀，确认无磁珠残留。
7. 下游备用：细胞更换完全培养基重悬，用于 Naive CD8+ T 与巨噬细胞共培养实验。
| 指标 | 分选前（基线） | 分选后（富集组） |
|---|---|---|
| 细胞活率 | 90% | 99% |
| Naive CD8+ T 纯度 | 1.5%（本底） | 92% |
| 表型 | — | CD44low CD62Lhigh，初始表型保存完好，无预激活 |
| 磁珠残留 | — | 沉淀干净，无磁珠残留 |
分选前样本总细胞量 1×108、活率 90%，目标 Naive CD8+ T 本底占比仅 1.5%；
分选后细胞活率维持 99%，沉淀干净无磁珠残留，流式检测目标细胞纯度达到 92%，CD44low CD62Lhigh 的典型初始 T 细胞表型保存完好、无预激活，满足共培养实验要求。
针对脾脏来源、Naive CD8+ T 细胞本底占比极低的样本，使用 FiniGet 分必得® 130-6013 试剂盒负向分选，可以有效富集小鼠 Naive CD8+ T 细胞；分选后细胞活率维持在高水平，记忆 / 效应型 T 等杂细胞去除效果显著，收获细胞无磁珠标记，适配体外共培养、极化、T 细胞激活等下游功能实验。
对初次上手磁珠分选的实验者来说，这次 Demo 也验证了一件事：本底占比低并不是分选失败的理由——把杂细胞去除这一环做扎实，低丰度目标细胞同样能拿到稳定的纯度与表型。
FiniGet 分必得® 小鼠 Naive CD8+ T 细胞分选试剂盒｜货号：130-6013
无柱式负向免疫磁珠分选，无需分选柱，上手门槛低；负选模式下目标 Naive CD8+ T 不结合磁珠、不引入抗体刺激信号；适配脾脏、淋巴结样本，适合 T 细胞共培养、体外分化、过继回输等免疫学研究。查看产品详情页
需要从小鼠脾脏或淋巴结分选其他 T 细胞亚群，可以关注 FiniGet 分必得® 系列：130 系列覆盖小鼠 CD3+、CD4+、CD8+、Naive CD8+ 等亚群，配套分选磁力架与分选缓冲液。
A：可以。本次 Demo 样本目标细胞初始占比仅 1.5%，分选后纯度达到 92%。纯度主要取决于杂细胞的去除能力；本底越低，收获细胞总量会相应下降，该试剂盒针对低丰度 Naive CD8+ T 的去除面板经过优化，杂细胞清除能力较强。
A：不会。本产品为负向分选，目标 Naive CD8+ T 不被抗体和磁珠标记，全程无刺激信号；本次分选后细胞表型稳定，适合与巨噬细胞共培养、体外刺激分化等功能实验。
A：有两个环节要留意：一是磁力架静置时间要充足；二是吸取上清时动作轻柔，不要扰动管壁吸附的杂细胞磁珠层，避免杂细胞混入目标组分拉低纯度。
A：支持。脾脏、淋巴结都是该试剂盒的推荐样本类型；淋巴结中 Naive T 本底一般更高，更容易获得高产量、高纯度的细胞。
品牌：FiniGet 分必得®｜原代免疫细胞磁珠分选
专注原代免疫细胞磁珠分选试剂盒开发，提供试剂盒、配套磁力架、上门 Demo 技术支持服务
技术咨询：400-090-1923｜邮箱：service@gooniebio.com
出品：信天翁生物科技（广州）有限公司
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