2X qPCR SYBR Green kit (with UDG)
应用：
种属反应性：
宿主种属：
UDG防污染系统 降低气溶胶污染
一键复制信息
- 产品描述
- 组成成分
- 注意事项
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GOONIE 2×SYBR Green qPCR Mix（含UDG）（货号500-110）是一款2×即用型预混液，核心组分为热启动Taq DNA聚合酶、UDG和优化反应缓冲液。核心特点是内置UDG防污染系统：UDG能特异性识别并降解含尿嘧啶(dU)的DNA，对RNA和天然DNA无影响，可有效清除上一轮PCR产物气溶胶带来的残留污染，让qPCR结果更可靠。适用于动物、植物、微生物（含病毒）等各种DNA模板的核酸检测，灵敏度可达pg级。使用时只需加入引物、模板和水，使其工作浓度为1×即可上机。
产品规格总表
参数 规格 产品全称 2×SYBR Green qPCR Mix (with UDG) 货号 500-110 规格 100T（100次20 μL反应） 品牌 GOONIE 核心组分 热启动Taq DNA聚合酶、UDG（尿嘧啶-DNA糖基化酶）、SYBR Green荧光染料、dNTPs、优化反应缓冲液 配套组分 Nuclease-Free Water 防污染原理 UDG特异性识别并切除DNA链上的尿嘧啶(dU)碱基，降解上一轮含dU的PCR产物，避免气溶胶污染造成的假阳性 参比染料 不含参比染料，需根据仪器类型额外添加ROX校正染料 应用 SYBR Green荧光定量PCR，适用于动物、植物、微生物（含病毒）等各类DNA模板的核酸检测 模板用量 建议10-200 ng/20 μL反应 产物长度 100-500 bp（推荐100-200 bp） 灵敏度 可达pg级 储存条件 -15℃至-25℃避光保存1年；避免反复冻融；频繁使用可置4℃保存 运输条件 冰袋运输 用途说明 仅科研使用，不可用于临床诊断 核心优势
UDG防污染系统，降低气溶胶污染风险
与传统试剂盒相比，本产品通过UDG建立防污染系统。UDG（尿嘧啶-DNA糖基化酶）能特异性识别单链或双链DNA链上的尿嘧啶碱基(dU)，并将其从DNA链上切除，从而降解上一轮扩增残留在环境中的PCR产物。该酶对RNA无活性，对不含尿嘧啶碱基的待检测天然DNA模板也无影响，因此在清除污染的同时不会干扰目标检测，让结果更加可靠。
热启动Taq酶，特异性与灵敏度兼备
Mix的核心组分为热启动Taq DNA聚合酶，配合优化反应缓冲液，特异性好、灵敏度可达pg级，适合低丰度模板的检测场景。
2×预混液，操作简便
Mix已包含热启动Taq酶、UDG、SYBR Green染料、dNTPs和优化缓冲液，使用时只需加入引物、模板和水，使工作浓度为1×即可上机。减少加样步骤，降低多次操作带来的污染可能性，也降低了操作误差。
广谱DNA模板适用
广泛用于动物、植物、微生物（含病毒等）的各种DNA类核酸检测，兼容常规qPCR仪，是基因表达分析、病原检测、基因分型等实验的通用型预混液。
产品组成
货号 组分 规格（100T/20 μL） 说明 500-110A 2X qPCR SYBR Green mix (with UDG) 1 mL/支 反应预混液 500-110B Nuclease-Free Water 1 mL/支 无酶水 操作流程
第一步：冰上配制反应体系（20 μL）
试剂 单个反应体积（μL） 2X qPCR SYBR Green mix (with UDG) 10 10 μM 靶标上游引物 0.4 10 μM 靶标下游引物 0.4 ROX 校正染料（按仪器类型添加） X 模板 建议10-200 ng/20 μL Nuclease-Free Water 补至20 μL 注：①将各组分置于冰上融解，轻微混匀离心后，加液顺序按体系从多到少；②一般来说，反应体系中引物终浓度为0.2 μM即可得到较好的扩增效果，当反应性能比较差时，可在0.1-1.0 μM范围内调整引物浓度；③可根据检测需要增加检测重数。
第二步：设置对照
使用5 μL Nuclease-Free Water作为无模板对照（NTC），每组设置3个重复，用于监控污染、验证反应体系是否正常。
第三步：qPCR反应程序
步骤 循环数 反应温度 反应时间 采集信号 预变性 1 cycle 95℃ 30 sec 否 变性 40 cycle 95℃ 10 sec 否 延伸 60℃ 30 sec 是 熔解曲线 1 cycle 根据仪器设置 — 是 第四步：ROX校正染料添加（按仪器）
本产品不含参比染料。请根据qPCR仪类型，参照下表确定是否添加ROX校正染料及其浓度。
是否添加ROX 仪器 无需添加ROX (Bio-Rad) IQ5、CFX96、CFX384、CFX Connect、MJ Opticon、Opticon 2；(Cepheid) SmartCycler System、Smart Cycler II System；(Roche) LightCycler 2.0、480、96；(Qiagen) Rotor-Gene Q、3000、6000；(Bioer) Line-Gene；(Eppendorf) Mastercycler ep realplex；(Analytik Jena) qTOWER3 添加ROX
（终浓度0.4 μM）(Thermo) ABI 7000、7300、7700、7900、7900HT、7900HT Fast、StepOne、StepOnePlus 添加ROX
（终浓度0.08 μM）(Thermo) ABI 7500、7500 Fast、ViiA7、QuantStudio 3/5、QuantStudio 6/7/12K Flex、QuantStudio Dx；(Agilent) Mx3000P、Mx3005P、MX4000 注：ROX Reference Dye产品在反应体系中建议50×稀释使用（例如，50 μL反应体系中添加1 μL ROX Reference Dye）；如果实验结果不理想，可调整ROX Reference Dye添加量。
注意事项
- 2X qPCR SYBR Green mix (with UDG)含有光敏染料，因此需要避光且低温储存，长期不用时可存于-20℃，若使用较频繁可置于4℃保存，避免反复冻融。
- 反应液的配制请使用RNase-free枪头、EP管等，尽量避免污染。
- 本制品中未配有ROX Reference Dye，如果反应中需要添加ROX以校正孔间荧光信号值误差，请根据仪器设备说明书要求确定是否添加及添加浓度。
- 将各组分置于冰上融解，轻微混匀离心后，加液顺序按体系从多到少。
- 建议设置NTC（无模板对照），用于监控污染和验证反应体系。
- 本产品仅用于科研，不可用于临床诊断。
引物设计原则
- 扩增产物长度控制在100-500 bp，尤其推荐100-200 bp之内。
- 引物长度17-25 nt，GC含量40-60%，碱基分布均匀。
- 正反向引物Tm值差异不超过2℃，推荐退火温度60℃左右。
- 使用BLAST确认引物特异性，避免与非靶序列结合。
- 避免引物自身或引物之间形成二聚体，尤其注意3'端互补。
性能实测数据
常见问题 FAQ
Q：UDG防污染是怎么工作的？会不会影响我的目标DNA？
A：UDG（尿嘧啶-DNA糖基化酶）能特异性识别DNA链上的尿嘧啶碱基(dU)，并将其从链上切除，从而降解上一轮扩增残留在环境中的含dU PCR产物，避免气溶胶污染造成的假阳性。UDG对RNA无活性，对待检测的、不含尿嘧啶碱基的天然DNA模板也无影响，因此不会干扰目标检测。
Q：500-110、500-102和500-100有什么区别？该怎么选？
A：两款都用于SYBR Green qPCR。500-110（本款）主打UDG防污染，核心是热启动Taq酶+UDG，不含参比染料，需要根据仪器自备ROX；500-100主打加样可视化，含蓝色追踪染料与黄色Dilution Buffer，已预混广谱参比染料、无需额外加ROX；500-102 已内置ROX，在需要ROX校正的仪器（如ABI等常规机型）上开箱即用，但不含UDG防污系统。如果实验重点是控制残留污染、做的是重复性要求较高的病原或基因检测，可以优先考虑500-110；如果重点是避免384孔板加错模板，可以优先考虑500-100；如果无需防污又需要ROX，可以考虑500-102。
Q：这款Mix需要额外加ROX吗？
A：需要。本产品不含参比染料，请根据qPCR仪类型添加ROX：ABI 7000/7300/7700/7900系列等需高浓度ROX（终浓度0.4 μM）；ABI 7500/QuantStudio系列、Agilent Mx3000P/Mx3005P等需低浓度ROX（终浓度0.08 μM）；Bio-Rad CFX系列、Roche LightCycler系列、Qiagen Rotor-Gene系列等无需添加。ROX Reference Dye建议50×稀释使用。
Q：扩增曲线没有起峰/没有Ct值，怎么回事？
A：常见原因包括：①模板浓度太低或降解——增加模板量或重新制备；②引物设计不当——建议至少设计2对引物筛选；③PCR程序设置错误——确认是否设置了荧光采集步骤；④试剂失效——检查试剂是否在有效期内、是否反复冻融；⑤模板中有抑制剂——梯度稀释模板后重试。
Q：熔解曲线出现双峰或多峰，是什么原因？
A：双峰通常意味着非特异性扩增。如果杂峰Tm值在75℃以下，可能是引物二聚体，可降低引物浓度或提高退火温度；如果杂峰Tm值在75℃以上，可能是非特异性产物，建议BLAST检查引物特异性、重新设计引物。
Q：NTC（无模板对照）有扩增信号，是不是试剂被污染了？
A：不一定。先看熔解曲线：如果NTC的Tm值低于80℃且Ct值>35，通常是引物二聚体，优化引物浓度即可；如果NTC的Ct值<35且Tm值与目的产物一致，说明体系被污染，需要更换新鲜试剂、使用带滤芯枪头、实验分区操作。本产品含UDG防污染系统，对含dU的残留产物有降解作用，可进一步降低此类污染风险。
Q：复孔之间Ct值差异大，重复性差，怎么办？
A：常见的原因是加样误差。建议：①提前配制预混液，减少逐孔加样的误差；②移液器定期校准；③混匀后短暂离心，排除气泡；④模板浓度太低时Ct值波动会放大，建议提高模板量使Ct值落在15-30之间。
Q：如何判断qPCR实验是否成功？看哪些指标？
A：合格的qPCR实验应满足：①扩增曲线呈标准S型，基线平直；②熔解曲线为对称单峰；③NTC无扩增或Ct>35；④复孔Ct值差异<0.3；⑤标准曲线扩增效率90-110%，R²>0.98。
技术支持
如有产品使用、实验优化或技术问题，欢迎联系信天翁生物技术团队获取支持。
联系渠道 信息 咨询热线 400-090-1923 官方邮箱 service@gooniebio.com 官网 www.gooniebio.cn 地址 广州市黄埔区瑞和路39号纳金科技园 品牌：GOONIE｜分子生物学试剂 ｜ 出品：信天翁生物科技（广州）有限公司
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产品组成
组分 规格
500 rxns (20 μl/rxn)
货号 Fast Taq Template Visualization SYBR Green qPCR Mix 5×1 mL 500-100A 10×Dilution Buffer 1×1 mL 500-100B Nuclease-Free Water 1×5 mL 500-100C -
注意事项
1. 本产品含有荧光染料，储存时和使用过程中均需尽可能避光及反复冻融。
2. 待 Mix 完全解冻融化后方可使用，且使用过程前需上下颠倒混匀，不能涡旋或振荡混匀，避免产生过多的气泡。
3. 本产品中已添加广型的参比染料，适配于市面上的各种 qPCR 仪，qPCR 反应液中无需额外添加参比染料来校正各个反应。
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