Fast Taq Template Visualization SYBR Green qPCR Mix
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加样防呆神器，384孔都不怕错
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- 产品描述
- 组成成分
- 注意事项
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GOONIE Fast Taq Template Visualization SYBR Green qPCR Mix（货号500-100）是一款2×即用型预混液，含SYBR Green 荧光染料与强力抗抑制Taq酶。核心亮点是加样可视化：Mix含蓝色染料，模板用黄色10×Dilution Buffer稀释后，蓝+黄=绿色，通过颜色变化直观追踪是否已加模板，384孔板也不加错。已含广谱参比染料，兼容主流qPCR仪，无需额外添加ROX。
产品规格总表
参数 规格 产品全称 Fast Taq Template Visualization SYBR Green qPCR Mix 货号 500-100 规格 500T（500次20 μL反应） 目录价 ¥600.00 品牌 GOONIE 核心组分 强力抗抑制Taq酶、SYBR Green Ⅰ荧光染料、蓝色追踪染料、dNTPs、优化缓冲体系 配套组分 10×Dilution Buffer（黄色染料）、Nuclease-Free Water 可视化原理 蓝色Mix + 黄色Dilution Buffer稀释的模板 → 绿色反应体系，颜色追踪移液 参比染料 已添加广谱参比染料，兼容主流qPCR仪，无需额外添加ROX 应用 SYBR Green荧光定量PCR（相对定量/绝对定量） 模板用量 建议10-200 ng/20 μL反应 储存条件 -20℃避光保存2年；解冻后4℃避光稳定3个月；避免反复冻融 运输条件 冰袋运输 核心优势
加样可视化，384孔也不加错
Mix含蓝色染料，模板用黄色10×Dilution Buffer稀释后加入，蓝+黄=绿色。通过颜色变化直观判断每个孔是否已加模板，尤其适合384孔板等高通量场景，彻底告别"到底加没加"的焦虑。
强力抗抑制Taq酶
核心组分为经过改造的强力Taq酶，对常见PCR抑制剂（如盐离子、醇类、酚类残余）具有较强耐受性，即使模板纯度不够理想也能获得稳定扩增。
2×预混液，操作极简
Mix已包含Taq酶、dNTPs、SYBR Green染料、参比染料和优化缓冲液，使用时只需加入引物、模板和水，使工作浓度为1×即可上机。减少加样步骤，降低操作误差。
广谱参比染料，兼容主流仪器
Mix中已添加广谱参比染料，适配ABI 7500/7900/QuantStudio系列、Bio-Rad CFX系列、Roche LightCycler系列、Agilent Mx3000P/Mx3005P等主流荧光定量PCR仪，无需额外添加ROX或其他参比染料。
产品组成
组分 规格（500T） 货号 Fast Taq Template Visualization SYBR Green qPCR Mix 5 × 1 mL 500-100A 10×Dilution Buffer（黄色染料） 1 × 1 mL 500-100B Nuclease-Free Water 1 × 5 mL 500-100C 操作流程
步骤一：模板可视化（选做）
如需要移液追踪，先将10×Dilution Buffer添加至模板中，使终浓度为1×。示例：9 μL模板 + 1 μL 10×Dilution Buffer，混匀。如不需要追踪，跳过此步。
第二步：配置反应体系（20 μL）
试剂 使用量 终浓度 Fast Taq SYBR Green qPCR Mix（2×） 10 μL 1× 正向引物（10 μM） 0.4 μL 0.2 μM 反向引物（10 μM） 0.4 μL 0.2 μM 模板 X μL 建议10-200 ng/20 μL Nuclease-Free Water 补至20 μL — 注：①引物建议浓度范围0.1-1.0 μM，一般0.2 μM即可；②如使用Dilution Buffer追踪，模板加入量应为总体系的10%-25%；③cDNA原液加入量不超过总体系的10%；④推荐将模板稀释后加入，提高重复性。
第三步：qPCR反应程序
两步法（推荐）：
步骤 循环数 温度 时间 预变性 1 95℃ 30 sec 变性 40 95℃ 10 sec 退火/延伸（采光） 60℃ 30 sec 熔解曲线 1 仪器默认 仪器默认 三步法：预变性95℃ 30 sec（1循环）；变性95℃ 10 sec → 退火55-65℃ 10 sec → 延伸72℃ 30 sec采光（40循环）；熔解曲线（仪器默认）。
注意事项
- 本产品含荧光染料，储存和使用过程中均需尽可能避光，避免反复冻融。
- 待Mix完全解冻后方可使用，使用前上下颠倒混匀，不可涡旋或振荡，避免产生过多气泡。
- Mix已添加广谱参比染料，兼容主流qPCR仪，反应液中无需额外添加ROX。
- 模板加入量不宜超过总体系的25%（使用Dilution Buffer时）或10%（cDNA原液），否则可能影响反应效率。
- 建议设置NTC（无模板对照）和阳性对照，用于监控污染和验证反应体系。
引物设计原则
- 扩增产物长度控制在80-200 bp，不超过300 bp。
- 引物长度17-25 nt，GC含量40-60%，A/T/G/C分布均匀。
- 正反向引物Tm值差异不超过2℃，推荐退火温度60℃左右。
- 使用BLAST确认引物特异性，避免与非靶序列结合。
- 避免引物自身或引物之间形成二聚体，尤其注意3'端互补。
性能实测数据
以下均为客户使用 GOONIE 500-100 处理真实样本后的回传结果（客户信息已脱敏）：
用400-100试剂盒提取细胞RNA后，用500-101试剂盒逆转录的cDNA作为模板，用500-100试剂盒进行qPCR实验。
文献引用
以下SCI文献在实验方法（RT-qPCR）中使用了GOONIE 500-100 Fast Taq SYBR Green qPCR Mix（信息来自公开数据库及全文方法学核实）：
序号 文献标题（英文原文） 期刊 IF JCR 中科院分区 年份 1 Peripheral nerve injury-induced remodeling of the tumor-associated macrophages promotes immune evasion in breast cancer J Exp Clin Cancer Res 12.8 Q1 医学1区 2025 2 Genome-Wide Identification, Function, and Expression Analysis of the ABC Transporter Gene Family in Forest Musk Deer (Moschus berezovskii) Under Musk Secretion Stage Animals 2.7 Q1 农林科学2区 2025 3 Network Pharmacology Reveals the Mechanism of Sini Decoction Against Aconitum carmichaelii Debeaux-Induced Cardiotoxicity Chemistry & Biodiversity 2.5 Q3 3区 2026 4 Revealing the mechanism of heptamethoxyflavone against diabetic kidney disease: an integrated study combining network pharmacology, molecular docking and experimental validation Biochem Biophys Res Commun (BBRC) 2.2 Q3 生物学4区 2026 文献覆盖肿瘤免疫、动物基因组学、中药药理学和代谢疾病等领域，分别在Roche LightCycler 480、ABI QuantStudio等主流qPCR仪上完成，体现了500-100在不同研究体系和仪器平台上的通用性。IF数据来源于2024年JCR（Journal Citation Reports）。
常见问题 FAQ
Q：SYBR Green法和TaqMan探针法有什么区别？怎么选？
A：SYBR Green是染料法，结合所有双链DNA发光，成本低、引物设计简单，但需要熔解曲线验证特异性；TaqMan是探针法，特异性更高、可做多重，但成本高、需要额外设计探针。如果目标基因明确、预算有限，SYBR Green是首选；如果需要区分高度同源序列或做多重检测，选TaqMan。
Q：扩增曲线没有起峰/没有Ct值，怎么回事？
A：常见原因包括：①模板浓度太低或降解——增加模板量或重新制备；②引物设计不当——建议至少设计2对引物筛选；③PCR程序设置错误——确认是否设置了荧光采集步骤；试剂失效——检查试剂是否在有效期内、是否反复冻融；⑤模板中有抑制剂——梯度稀释模板后重试。
Q：熔解曲线出现双峰或多峰，是什么原因？
A：双峰通常意味着非特异性扩增。如果杂峰Tm值在75℃以下，可能是引物二聚体，可降低引物浓度或提高退火温度；如果杂峰Tm值在75℃以上，可能是非特异性产物，建议Blast检查引物特异性、重新设计引物。
Q：NTC（无模板对照）有扩增信号，是不是试剂被污染了？
A：不一定。先看熔解曲线：如果NTC的Tm值低于80℃且Ct值>35，通常是引物二聚体，优化引物浓度即可；如果NTC的Ct值<35且Tm值与目的产物一致，说明体系被污染，需要更换新鲜试剂、使用带滤芯枪头、实验分区操作。
Q：复孔之间Ct值差异大，重复性差，怎么办？
A：最常见的原因是加样误差。建议：①提前配制预混液，减少逐孔加样的误差；②移液器定期校准；③混匀后短暂离心，排除气泡；④模板浓度太低时Ct值波动会放大，建议提高模板量使Ct值落在15-30之间。
Q：cDNA模板加多少合适？加多了会有问题吗？
A：一般推荐每个qPCR反应加入1-100 ng cDNA（或总RNA逆转录产物的1/10体积）。cDNA加量过多会引入逆转录反应中的抑制剂（如盐离子、dNTP残余），反而降低扩增效率。
Q：如何判断qPCR实验是否成功？看哪些指标？
A：合格的qPCR实验应满足：①扩增曲线呈标准S型，基线平直；②熔解曲线为对称单峰；③NTC无扩增或Ct>35；复孔Ct值差异<0.3；④标准曲线扩增效率90-110%，R²>0.98。
Q：500-100这款Mix支持哪些仪器？
A：SYBR Green qPCR Mix通常兼容主流荧光定量PCR仪。
技术支持
如有产品使用、实验优化或技术问题，欢迎联系信天翁生物技术团队获取支持。
联系渠道 信息 咨询热线 400-090-1923 官方邮箱 service@gooniebio.com 官网 www.gooniebio.cn 地址 广州市黄埔区瑞和路39号纳金科技园 品牌：GOONIE｜分子生物学试剂 ｜ 出品：信天翁生物科技（广州）有限公司
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产品组成
组分 规格
500 rxns (20 μl/rxn)
货号 Fast Taq Template Visualization SYBR Green qPCR Mix 5×1 mL 500-100A 10×Dilution Buffer 1×1 mL 500-100B Nuclease-Free Water 1×5 mL 500-100C -
注意事项
1. 本产品含有荧光染料，储存时和使用过程中均需尽可能避光及反复冻融。
2. 待 Mix 完全解冻融化后方可使用，且使用过程前需上下颠倒混匀，不能涡旋或振荡混匀，避免产生过多的气泡。
3. 本产品中已添加广型的参比染料，适配于市面上的各种 qPCR 仪，qPCR 反应液中无需额外添加参比染料来校正各个反应。
关键词
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