无内毒素质粒小提试剂盒
21min快速提取 超纯无内毒素
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- 产品描述
- 组成成分
- 注意事项
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一、产品简介
GOONIE 400-201 无内毒素质粒小提试剂盒，采用改良碱裂解法结合柱式硅胶膜技术，配合改良除内毒素液，从 1~5 mL 过夜培养菌液中提取高质量质粒 DNA。内毒素残留极低（＜0.1 EU/μg），可直接用于细胞转染、动物注射、酶切、PCR、测序等下游实验。操作简便快捷，35 min 内即可完成质粒提取。50 次反应装量。
二、产品规格总表
参数 详情 产品名称 无内毒素质粒小提试剂盒（Endotoxin-Free Plasmid Mini Prep Kit） 货号 400-201 品牌 GOONIE / 信天翁生物 规格 50 次反应（50T） 提取原理 碱裂解法 + 硅胶膜柱式纯化 + 改良除内毒素液 菌液用量 1~5 mL 过夜培养 内毒素残留 ＜0.1 EU/μg 下游应用 细胞转染、动物注射、酶切、PCR、测序 操作时间 约 35 min 吸附柱型号 GA6 储存条件 室温保存 18 个月；RNase A 室温运输和保存，长期（＞3 个月）需 -20~8℃；加入 P1 后，P1 需 2~8℃ 保存，有效期 6 个月
三、产品组成
组分 装量 / 50T 货号 溶液 P1 11 mL 400-201A 溶液 P2 11 mL 400-201B 溶液 P3 11 mL 400-201C 除内毒素液 29 mL 400-201D 洗涤液 1 28 mL 400-201E 洗涤液 2 15 mL（需加 60 mL 无水乙醇） 400-201F RNase A 110 μL 400-201G 洗脱缓冲液 10 mL 400-201H GA6 吸附柱（含收集管） 50 个 400-201I
四、实验前准备
1. 首次使用前，将 RNase A 全部加入至溶液 P1 中，混匀后做上标记。
2. 首次使用前，向洗涤液 2 中加入 60 mL 无水乙醇，混匀后做上标记。
3. 准备 1.5/2 mL 离心管、无水乙醇。
五、操作步骤
Step 1 · 收集菌体
按需取 1~5 mL 过夜培养菌液于 2 mL 离心管中，13000×g 离心 1 min 收集菌体（菌液较多时可多次离心合并至同一管）。吸弃上清，液体弃尽。
Step 2 · 重悬菌体
加入 200 μL 溶液 P1（已含 RNase A），涡旋直至菌体完全重悬。
注意：菌体须完全重悬分散，否则影响后续碱裂解效率及产量。
Step 3 · 碱裂解
加入 200 μL 溶液 P2，温和地上下颠倒 8 次，室温静置 3 min（不超过 5 min）。
注意：切勿剧烈震荡，避免基因组 DNA 断裂残留。裂解时间不超过 5 min，防止质粒受损。此时菌液应变为清亮黏稠；若仍未清亮，可能是菌体过多、裂解不彻底，应减少菌量。
Step 4 · 中和沉淀
加入 200 μL 溶液 P3，立即上下颠倒 15 次，此时应出现白色絮状沉淀。13000×g 离心 10 min。
注意：P3 加入后须立即混匀，避免局部沉淀。
Step 5 · 除内毒素
将上清液（约 550 μL）转移至新的 2 mL 离心管中，加入等体积除内毒素液，混匀。
Step 6 · 上柱结合
将步骤 5 的混合液转移至 GA6 吸附柱（已放入收集管）中，13000×g 离心 30 sec，弃滤液。
注意：吸附柱最大承载容积 750 μL，若混合液超过该体积，需分次上柱。
Step 7 · 重复上柱
重复步骤 6，直至全部混合液上柱完毕。
Step 8 · 洗涤液 1 洗涤
加入 500 μL 洗涤液 1 至吸附柱中，室温静置 30 sec，13000×g 离心 30 sec，弃滤液。
Step 9 · 洗涤液 2 洗涤
加入 700 μL 洗涤液 2（已加 60 mL 无水乙醇）至吸附柱中，室温静置 30 sec，13000×g 离心 30 sec，弃滤液。
Step 10 · 重复洗涤液 2
重复步骤 9 一次。
Step 11 · 干柱离心
将吸附柱放回收集管中，13000×g 离心 2 min，甩干残留液体。
Step 12 · 洗脱质粒
将吸附柱放入新的 1.5 mL 离心管中，加入 30~100 μL ddH₂O 至吸附柱膜中央，室温静置 2 min，13000×g 离心 1 min，弃吸附柱。
Step 13 · 保存
提取的质粒 DNA 于 -20℃ 保存。
六、注意事项
1. 溶液 P2 在低温时可能有沉淀析出，若有沉淀，置于 37℃ 复溶至澄清后使用。
2. 各组分使用后应及时盖紧，避免醇挥发或 pH 变化。
3. 本产品仅用于科研，不可用于诊断。
七、常见问题（FAQ）
问题 解答 提取的质粒内毒素含量是多少？ ＜0.1 EU/μg，可直接用于转染、动物注射等对内毒素敏感的实验。 本试剂盒一次能提取多少质粒？ 50 次反应装量，每次可处理 1~5 mL 过夜菌液。 小提试剂盒和大提（400-204）有什么区别？ 400-201 适用于 1~5 mL 菌液，操作快（约 35 min），适合快速筛选和小量制备；400-204 适用于 100~200 mL 菌液，适合大量制备高纯度质粒。 可用于哺乳动物细胞转染吗？ 可以。内毒素含量极低，适合 HEK293、CHO 等常见细胞系的转染实验。 可用于动物体内注射吗？ 可以。产品专为去除内毒素设计，提取的质粒可用于小鼠等动物模型注射。 洗涤液 2 需要额外加乙醇吗？ 是的，首次使用前需向 15 mL 洗涤液 2 中加入 60 mL 无水乙醇，混匀后使用。 RNase A 加入 P1 后能保存多久？ 加入后混匀，溶液 P1 需 2~8℃ 保存，有效期 6 个月。 溶液 P2 出现沉淀怎么办？ 溶液 P2 低温时可能有沉淀析出，置于 37℃ 复溶至澄清即可正常使用，不影响提取效果。 质粒产量偏低怎么办？ 检查：① 菌体是否完全重悬；② P2 裂解是否充分（溶液应变清亮黏稠）；③ P3 中和是否立即混匀；④ 菌液是否为对数后期（OD600 ≈ 2~4）。可尝试增加菌量至 5 mL。
八、相关产品信息
相关产品 说明 400-204 无内毒素质粒大提试剂盒 适用于 100~200 mL 菌液的大规模质粒制备，10T 装量 120-6001 质粒小提试剂盒 常规质粒小提（非无内毒素版本），适合仅需酶切/PCR 等常规应用
九、联系方式
品牌：GOONIE / 信天翁生物
官网：www.gooniebio.cn
邮箱：service@gooniebio.com
电话：400-090-1923
地址：广州市黄埔区瑞和路39号纳金科技园 -
产品组成
组分 装量/50 T 货号 溶液 P1 13 mL 400-201A 溶液 P2 13 mL 400-201B 溶液 P3 13 mL 400-201C 除内毒素液 20 mL 400-201D 除蛋白液 28 mL 400-201E RNase A 260 μL 400-201F 溶液 L 260 μL 400-201G ddH2O 10 mL 400-201H 吸附柱&收集管 50 套 400-201I -
注意事项
1、溶液 P2 在低温时会有沉淀析出 ，若有沉淀析出 ，将其置于 37℃中复溶至溶液澄清后方可使用。
2、各组分使用后应及时盖紧盖子 ，避免长时间暴露于空气中导致醇挥发、 pH 值变化等。
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