无内毒素质粒大提试剂盒
32min快速提取 引爆效率革命
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- 产品描述
- 组成成分
- 注意事项
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一、产品简介
GOONIE 400-204 无内毒素质粒大提试剂盒，采用经典碱裂解法结合柱式硅胶膜技术，配合改良除内毒素液，从 100~200 mL 过夜培养菌液中提取高纯度质粒 DNA。单次提取可获得 0.2~1.5 mg 质粒 DNA，内毒素残留极低，可直接用于细胞转染、酶切、PCR、测序等下游实验。操作简便快捷，10 次反应装量。
二、产品规格总表
参数 详情 产品名称 无内毒素质粒大提试剂盒（Endotoxin-Free Plasmid Maxi Prep Kit） 货号 400-204 品牌 GOONIE / 信天翁生物 规格 10 次反应（10T） 提取原理 碱裂解法 + 硅胶膜柱式纯化 + 改良除内毒素液 菌液用量 100~200 mL 过夜培养 质粒产量 0.2~1.5 mg / 次 质粒纯度 无内毒素，纯度高 下游应用 细胞转染、酶切、PCR、测序 储存条件 室温储存运输；RNase A 加入 P1 后，P1 需 2~8℃ 保存，有效期 6 个月
三、产品组成
组分 装量 / 10T 货号 溶液 P1 82 mL 400-204A 溶液 P2 82 mL 400-204B 溶液 P3 82 mL 400-204C 除内毒素液 240 mL 400-204D 洗涤液 1 105 mL 400-204E 洗涤液 2 21 mL（需加 84 mL 无水乙醇） 400-204F RNase A 0.82 mL 400-204G 洗脱液 22 mL 400-204H 吸附柱 10 个 400-204I 收集管 10 个 400-204J
四、实验前准备
1. 首次使用前，将 RNase A 全部加入至溶液 P1 中，混匀后做上标记。
2. 首次使用前，洗涤液 2 需加入 84 mL 无水乙醇，混匀后做上标记。
3. 准备无水乙醇和 50 mL 离心管。
五、操作步骤
Step 1 · 收集菌体
按需取 100~200 mL 过夜培养菌液于 50 mL 离心管中，8000×g 离心 3 min 收集菌体（菌液较多时可多次离心合并）。吸弃上清，液体弃尽。
Step 2 · 重悬菌体
加入 8 mL 溶液 P1（已含 RNase A），涡旋直至菌体完全重悬。
注意：菌体须完全重悬分散，否则影响后续碱裂解效率及产量。
Step 3 · 碱裂解
加入 8 mL 溶液 P2，温和上下颠倒 8 次，室温静置 4 min（不超过 5 min）。
注意：切勿剧烈震荡，避免基因组 DNA 断裂污染。裂解后菌液应变清亮黏稠，若仍浑浊需减少菌量。
Step 4 · 中和沉淀
加入 8 mL 溶液 P3，立即上下颠倒 15 次彻底中和，絮状沉淀均匀分散后室温静置 5~10 min，8000×g 离心 10 min。
注意：P3 加入后须立即混匀，避免局部沉淀。
Step 5 · 除内毒素
将上清转移至新的 50 mL 无菌离心管（自备），加入等体积除内毒素液（约 23 mL），上下颠倒混匀。
Step 6 · 过柱结合
将混合液转移至吸附柱（已放入收集管），8000×g 离心 2 min，弃滤液。重复此步直至全部混合液上柱。
注意：吸附柱最大承载容积 14.5 mL，超出需分次上柱（每次 ≤12 mL）；角转子角度大时减至 10 mL，避免漏液。
Step 7 · 洗涤液 1 洗涤
加入 10 mL 洗涤液 1 至吸附柱中，8000×g 离心 2 min，弃滤液。
Step 8 · 洗涤液 2 洗涤（两次）
加入 10 mL 洗涤液 2（确认已加入无水乙醇），8000×g 离心 2 min，弃滤液。重复一次。
Step 9 · 干柱去乙醇
将吸附柱放回收集管，8000×g 离心 5 min。
Step 10 · 洗脱质粒
将吸附柱移至新的收集管，室温晾干数分钟或 65℃ 烘干 3 min 彻底去除乙醇残留。加入 1~2 mL 洗脱液至膜中央，室温静置 3 min，8000×g 离心 2 min，收集洗脱液。
注意：乙醇残留会影响产物纯度；洗脱体积建议 ≥1 mL；若用 ddH₂O 洗脱须确保 pH 7.0~8.5；预热洗脱液至 65℃ 或二次洗脱可提高效率。
Step 11 · 保存
提取的质粒 DNA 于 -20℃ 保存。
六、注意事项
1. 溶液 P2 低温时可能有沉淀析出，需 37℃ 复溶至澄清后再使用。
2. 各组分使用后及时盖紧，避免醇挥发或 pH 变化。
3. 本产品仅限科学研究使用，不可用于体外诊断。
七、常见问题 · FAQ
Q：溶液 P1 加入 RNase A 后能保存多久？
A：需 2~8℃ 保存，有效期 6 个月。
Q：洗涤液 2 怎么用？
A：首次使用前须向 21 mL 洗涤液 2 中加入 84 mL 无水乙醇，混匀后使用。建议做好标记以免遗忘。
Q：离心转速一定要 8000×g 吗？
A：说明书推荐 8000×g。若离心机转子角度较大，可适当降低转速（如 4000~8000×g），但需相应延长离心时间（参见说明书各步骤具体参数）。Q：裂解后菌液仍浑浊怎么办？
A：说明菌体过多、裂解不彻底。下次应减少菌液体积（如从 200 mL 降至 100~150 mL），确保溶液 P2 能充分裂解。Q：质粒产量偏低怎么排查？
A：① 确认菌体完全重悬（Step 2）；② 确认裂解时间不超过 5 min 且溶液清亮（Step 3）；③ 确认溶液 P2 无沉淀析出；④ 确认洗脱体积 ≥1 mL 且无乙醇残留。
八、相关产品
• 400-200 质粒小提试剂盒（Plasmid Mini Prep Kit）
• 400-201 无内毒素质粒小提试剂盒（Endotoxin-Free Plasmid Mini Prep Kit）
九、技术支持
• 客服电话：400-090-1923
• 技术支持邮箱：service@gooniebio.com
• 公司官网：www.gooniebio.com
• 地址：广州市黄埔区瑞和路39号纳金科技园 -
产品组成
组分 装量/10 T 货号 溶液P1 82 mL 400-204A 溶液P2 82 mL 400-204B 溶液P3 82 mL 400-204C 除内毒素液 120 mL 400-204D 除蛋白液 105 mL 400-204E RNase A 1.64 mL 400-204F 溶液L 1.64 mL 400-204G ddH2O 25 mL 400-204H 吸附柱 10个 400-204I 收集管 20个 400-204J -
注意事项
1、溶液P2在低温时会有沉淀析出 ，若有沉淀析出 ，将其置于37℃中复溶至溶液澄清后方可使用。
2、各组分使用后应及时盖紧盖子 ，避免长时间暴露于空气中导致醇挥发、 pH值变化等。
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