Lipo2000 转染试剂
高效转染 无需减血清培养基
一键复制信息
- 产品描述
- 组成成分
- 注意事项
-
产品保存：
4℃储存，有效期12个月。切勿冷冻！
产品简介：
本产品是基于脂质体纳米颗粒(LNP)递送技术的阳离子脂质体转染试剂，适合将核酸转染入培养的细胞中。本转染试剂对于常见的哺乳动物细胞系具有非常高的转染效率、重复性好、操作简单、无明
显的细胞毒性，且对于贴壁细胞和悬浮细胞都适用，可在含血清与抗生素的完全培养基中发挥作用。本试剂在转染大至13kb的质粒时，依然保持了高效率。
产品特征
1. 转染效率高，操作简便，毒性低，重复性好。对于大部分细胞系，如：HEK293T 、HEK293F、CHO和HeLa等，按照DNA用量(μg)和转染试剂(μL)的比例为1:2至1:3使用时，转染效率可达80%- 90%。
2. 兼容性好，转染可在有血清和抗生素存在的情况下进行，无需预先更换Opti-MEM®或其它无血清培养基。
3. 转染试剂为化学合成产物，不含动物源成分(Animal origin-free, AOF)。
4. 本品已经0.22µm滤膜过滤除菌。
DNA转染使用说明
（本说明书以6孔板，293T细胞为例）
1. 接种细胞
转染前一天，将293T细胞接种在6孔板中，3×10^5~5×10^5每孔，使用含10%血清的DMEM培养18-22小时。
2. 转染过程
a) 配置DNA稀释液（每孔）：将2 µg质粒DNA加入100 μL无血清DMEM培养基中，充分混匀。
b) 配置Lipo2000稀释液（每孔）：另取一个1.5 mL离心管，加入100 μL无血清DMEM培养基和
5 µL Lipo2000(吸取前先混匀)，轻柔混匀，室温静置5分钟。
c) 将DNA稀释液加到Lipo2000稀释液中，合并后轻柔混匀，室温静置20分钟，形成DNA- Lipo2000复合物。
d) 用移液枪将DNA-Lipo2000复合物分散滴入细胞培养孔中，轻轻摇晃6孔板以混匀。
e) 转染6小时后，除去旧的培养基，更换为2 mL新鲜的含10%血清的DMEM培养基。
f) 继续培养24到48小时，进行后续实验。
细胞培养容器
细胞培养基体积
（每孔）
稀释用无血清培养基体积 DNA 用量
转染试剂
96-well 板 100 µL 10 µL 0.1 µg 0.25 µL 48-well 板 200 µL 20 µL 0.2 µg 0.5 µL 24-well 板 500 µL 50 µL 0.5 µg 1.25 µL 12-well 板 1 ml 50 µL 1 µg 2.5 µL 6-well 板 2 ml 100 µL 2 µg 5 µL 6 cm 培养皿 4 ml 200 µL 4 µg 10 µL 10 cm 培养皿 10 ml 500 µL 10 µg 25 µL 不同规格细胞培养容器，DNA与转染试剂用量参考表 siRNA转染使用说明
（本说明书以6孔板，终浓度50 nM siRNA为例）
1.接种细胞
转染前一天，将合适数量的细胞接种在6孔板中，使得转染时细胞密度达30%-70%。
2.转染过程
a)取一个无菌的1.5mL 离心管，先加100 μL无血清培养基，再加入100pmoles siRNA，混匀。
b)另取一个1.5mL离心管，加入100 μL无血清培养基和5µL Lipo2000(吸取前先混匀)，轻柔混匀，室温静置5分钟。
c)将siRNA稀释液加到Lipo2000稀释液中，合并后轻柔混匀，室温静置20分钟。
d)用移液枪将转染复合物分散滴入细胞培养孔中，轻轻摇晃6孔板以混匀。
e)转染6小时后，除去旧的培养基，更换为2 mL新鲜的完全培养基。
f)继续培养24到48小时，利用qPCR或Western blot检测目的基因的表达水平。
细胞培养容 培养体积 稀释用无血清培养基体积 siRNA 用量 转染试剂 24 孔板 500 µL 50 µL 25 pmoles 1.5 µL 12 孔板 1 ml 50 µL 50 pmoles 2.5 µL 6-well 板 2 ml 100 µL 100 pmoles 5 µL 6 cm 培养皿 4 ml 200 µL 200 pmoles 10 µL 10 cm 培养皿 10 ml 500 µL 500 pmoles 25 µL 不同规格细胞培养容器，siRNA与转染试剂用量参考表 FAQ 问答
Q1：转染效率低，如何优化？
A：首先检查DNA质量，必须使用无内毒素、高纯度质粒（A260/280≈1.8）。其次优化DNA(μg):Lipo2000(μL)比例，从1:2到1:4梯度测试；细胞密度应控制为贴壁70%左右，悬浮细胞0.5-1×10^6/mL。
Q2：能否用于RNA或寡核苷酸转染？
A：可以。siRNA转染说明详见说明书，推荐终浓度50nM，siRNA:试剂（pmol:μL）约为20:1。其他小RNA如miRNA mimic或inhibitor可参考siRNA用量。
Q3：转染复合物可以直接加入含血清的培养基吗？
A：可以。这是本产品核心优势。只需按照说明书步骤在无血清DMEM中分别稀释DNA和试剂，混合静置20分钟后，直接将复合物滴入含血清的细胞培养孔中。
Q4：转染后何时可以检测？需要换液吗？
A：转染6小时后推荐更换新鲜完全培养基以降低潜在脂质体残留影响。通常24-48小时检测蛋白表达，若做RNA干扰，48-72小时提取RNA。
Q5：试剂能否反复冻融？
A：严禁反复冻融！ 冻融会破坏脂质体结构，导致转染效率骤降。请始终4℃保存，使用后立即放回。
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产品组成
货号 组分 规格 100-507 Lipo2000转染试剂 1.5 mL -
DNA转染注意事项
1. 转染前细胞须处于良好的生长状态。 选用处于对数生长期、活力高、传代次数低的细胞可获得较佳的转染效果
2. 质粒DNA的质量是转染成功的关键。建议使用高纯度，无内毒素质粒。质粒用量需根据细胞类型和具体试验条件而调整。
3. 根据具体的试验条件和细胞类型，DNA(µg)/转染试剂(µL) 的比例建议在 1:1至1:4之间优化。过量会加剧细胞毒性。转染时间不宜超过6小时。
4. 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
5. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
6. 使用中遇到任何问题，请联系我们的技术支持。
siRNA转染注意事项
1. 转染前细胞须处于良好的生长状态。 选用处于对数生长期、活力高、传代次数低的细胞可获得较佳的转染效果
2. 建议使用高质量的siRNA，建议使用RNase-free ddH2O溶解干粉，终浓度为20µM。
3. 根据具体的试验条件和细胞类型，调整siRNA的终浓度和转染试剂的用量。
4. 本品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
5. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
6. 使用中遇到任何问题，请联系我们的技术支持。
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