AF488 anti-mouse FOXP3 Antibody（FJK-16s）
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NeoMab® · AF488 Rat Anti-mouse FOXP3 Antibody (FJK-16s) · 21-27004-12 / 21-27004-15
产品简介
NeoMab® AF488 标记大鼠抗小鼠 FOXP3 单克隆抗体（克隆号 FJK-16s），0.5 mg/mL 高浓度，推荐用量 ≤0.25 µg/百万细胞，Ex/Em 490/513 nm，适用于小鼠 调节性 T 细胞（Treg）中 FOXP3 转录因子的流式细胞术检测。2-8℃ 避光保存，有效期两年。
FOXP3（Forkhead Box P3）是一种叉头/翼状螺旋家族转录调控因子，分子量 49-55 kDa，是调节性 T 细胞（Treg）发育和功能的关键调控分子。在小鼠中，FOXP3 组成性高表达于 CD4+CD25+ Treg 细胞，其基因缺陷会导致"scurfy"（sf）小鼠出现严重的自身免疫性疾病。
核心参数
参数 规格 品牌 NeoMab® 货号 21-27004-12（25 µg）/ 21-27004-15（100 µg） 克隆号 FJK-16s 宿主 Rat 反应性 Mouse 同种型 Rat IgG2a, κ 抗体类型 单克隆抗体 标记物 AF488（Alexa Fluor 488） Ex/Em 490 / 513 nm 抗体浓度 0.5 mg/mL 推荐用量 ≤0.25 µg/百万细胞（100 µL 染色体系），建议滴定确定最适浓度 应用 Flow Cytometry（流式细胞术） 保存 2-8℃ 避光保存，不可冷冻，有效期两年
FOXP3 靶点背景
FOXP3（Forkhead Box P3，又称 SCURFIN、JM2）是 forkhead/winged-helix 家族的转录调控因子，分子量 49-55 kDa。该基因最早在"scurfy"（sf）小鼠模型中被鉴定，FOXP3 基因缺陷会导致严重的自身免疫性疾病。
在小鼠中，FOXP3 组成性高表达于 CD4+CD25+ 调节性 T 细胞（Treg 细胞），是 Treg 细胞发育、维持和抑制功能的核心调控分子。在 CD4+CD25- 效应 T 细胞中异位表达 FOXP3，可使其获得 Treg 细胞的表型和功能。
主要功能：
• 调控 Treg 细胞的发育和分化
• 维持免疫耐受，抑制自身免疫反应
• 抑制效应 T 细胞的增殖和细胞因子分泌
• 在肿瘤免疫逃逸和移植耐受中发挥重要作用
流式染色流程
一、制备单细胞悬液
收集小鼠脾脏或淋巴结细胞，用 1× PBS 洗涤 1-2 次，每次 350-500×g 离心 5 min，弃上清。
二、死活染色（选做）
在固定步骤之前，可使用死活细胞染料标记活细胞，以便后续圈门排除死细胞。
三、表面染色（选做）
如需联合检测表面标志物（如 CD4、CD25 等），可先进行表面染色。加入表面抗体，冰上避光孵育 20-30 min，用 1 mL 染色缓冲液洗涤，350-500×g 离心 5 min，弃上清。
四、固定破膜
每管加入 1 mL 1× Foxp3/转录因子固定/破膜液，缓慢吹打重悬细胞，室温避光孵育 30-60 min。
五、洗涤
350-500×g 离心 5 min，弃上清。每管加入 1-2 mL 1× 流式细胞术破膜缓冲液，缓慢吹打重悬，离心弃上清。
六、胞内染色
加入 100 µL 1× 破膜缓冲液重悬细胞，静置 10-15 min。加入 FJK-16s AF488 抗体，4℃ 避光孵育 30-45 min。
七、洗涤与检测
用 1-2 mL 1× 破膜缓冲液洗涤 2 次，每次 350-500×g 离心 5 min，弃上清。细胞重悬于 200-300 µL 1× 破膜缓冲液中，上机检测。
对照类型 用途 空白对照（未染色） 调节电压 单染/单阳性对照（Treg 细胞） 调节补偿 同型对照（Rat IgG2a AF488） 消除背景染色干扰 FMO（荧光扣除）对照 确定设门准确性
注意事项
1. 使用前快速离心抗体管，回收管壁上的液体。
2. 流式抗体使用浓度因样本而异，建议做滴定实验确定最适浓度。
3. AF488 标记物对光敏感，染色和孵育过程请避光操作。
4. FOXP3 为胞内转录因子，必须使用 Foxp3/转录因子固定破膜缓冲液试剂盒进行固定破膜处理。
5. 本产品仅用于科研，不可用于体外诊断。
常见问题 FAQ
Q: FJK-16s 克隆号可以检测人源 FOXP3 吗？
A: FJK-16s 克隆号的反应性为小鼠（Mouse），不适用于人源样本。如需检测人源 FOXP3，请选择人源交叉反应的克隆号（如 PCH101、259D/C7 等）。
Q: 21-27004-12（25 µg）和 21-27004-15（100 µg）怎么选？
A: 两者抗体浓度均为 0.5 mg/mL，区别在于包装规格。25 µg 适合预实验或小规模检测，100 µg 适合常规使用。按 0.25 µg/测试计算，25 µg 约可用 100 次，100 µg 约可用 400 次。
Q: AF488 通道和哪些荧光素不冲突？
A: AF488 Ex/Em 490/513 nm，对应流式细胞仪的 FITC/A488 通道（FL1）。多色方案中可与 PE（FL2）、PerCP/Cy5.5（FL3）、APC（FL4）等搭配使用。
Q: 检测 FOXP3 一定要固定破膜吗？
A: 是的。FOXP3 是胞内转录因子，位于细胞核内，抗体无法穿透完整的细胞膜和核膜。必须使用 Foxp3/转录因子固定破膜缓冲液试剂盒进行固定和破膜处理，使抗体能够进入细胞核结合 FOXP3。
Q: 可以同时检测表面标志物吗？
A: 可以。FOXP3 常与 CD4、CD25 等表面标志物联合检测，用于圈定 Treg 细胞（CD4+CD25+FOXP3+）。建议先进行表面染色，洗涤后再进行固定破膜和胞内 FOXP3 染色。注意表面抗体需耐受固定破膜处理，或选择已验证的克隆号。
技术支持
NeoMab® 隶属信天翁生物科技（广州）有限公司，专注重组抗体与流式抗体研发。客服 400-090-1923 / service@gooniebio.com
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产品组成：
货号/规格 组分名称 体积 21-27004-12 25T AF488 anti-mouse FOXP3 Antibody（FJK-16s） 125 μL 21-27004-15 100T AF488 anti-mouse FOXP3 Antibody（FJK-16s） 500 μL 保存：2-8℃避光保存。冰袋运输。
关键词
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