手把手教学 相对定量的qPCR数据处理计算的方法
发布时间:2025-02-28
第一次做qPCR不会数据处理怎么办！？看这一篇就够了。
qPCR可以对目的基因进行绝对定量和相对定量，没有用标准品，而是用内参基因来计算相对表达量的qPCR属于相对定量。今天我们讲解的计算方法就是适用于相对定量的qPCR实验。
整个过程可以简单总结为：
1.计算目的基因和内参基因的ΔCt值：ΔCt = Ct（目的基因） - Ct（内参基因）。
2.计算处理组与对照组之间的ΔΔCt值：ΔΔCt = ΔCt（处理组） - ΔCt（对照组）。
3.计算相对表达量：2^(-ΔΔCt)。
当我们跑完qPCR程序的时候，记得保存一下工程文件，方便以后可以查看实验条件和曲线。我们在确认熔曲和扩增曲线没有问题以后，将数据输出成excel。
excel表格里会包含很多内容,不同的仪器导出的文件也会不一样,我们只需要找到有孔位置编号和CT值的两列保留即可.然后尽快把对应的孔代表的基因和样本标记好.
那么我们就会得到一个表格，be like
整理好以后，我们先计算三个复孔的平均值:
通过直接复制完成所有复孔的均值计算
接下来，对于每一个样本，我们用它的目的基因的平均ct值减去内参基因的平均ct值
通过复制单元格完成4个样本的计算
接下来我们用实验组的目的基因和内参基因的差值减去对照组的这个差值
计算完全部差值
计算到这里，我们已经得到了△△Ct的值，然后就可以代入到公式 2^（-△△Ct）进行最后一步的计算。
计算完成，得到实验组的目的基因相对于对照组的表达量，上图的例子可以看到实验组1的目的基因表达量是对照组45.69%，实验组2是对照组的23.1%，实验组3则是57.97%。
如果担心自己有算错，还可以再次确认。我们知道CT值越小，则表达量越高，在内参基因表达量大致相似的情况下，可以通过判断到对照组的CT值更小，说明对照组的表达量应该更高，符合我们计算的结果，说明计算正确。
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