告别高价进口！免裂红CD3+ T细胞分选，实测纯度98.89%
发布时间:2026-10-28
在免疫学研究中，从小鼠脾脏中分离出高纯度的 CD3+ T 细胞，是开展下游实验的基础。过去，很多课题组为了求稳，往往习惯于整套采购进口试剂盒和配套磁力架。但遇到预算收紧，或是想尝试性价比更高的方案时，心里难免会犯嘀咕：国产的，到底行不行？
近期，信天翁生物技术人员前往广州医科大学番禺校区开展线下实操 Demo。课题组此前一直使用进口品牌的设备和耗材，这次面对起始活性仅 70%、红细胞占比达 50% 的脾脏样本，我们带着 FiniGet 分必得® 无柱阴性分选试剂盒（130-6001） 及配套国产单孔磁力架上门，采用免裂红方案，做了一次直观的平行实测。
| 项目 | 信息 |
|---|---|
| 批次 | G260728 |
| 实验地点 | 广州医科大学 番禺校区 |
| 使用产品 | FiniGet 分必得® 小鼠CD3+ T细胞分选试剂盒（130-6001） |
| 配套耗材 | FiniGet 分必得® 单孔磁力架（140-2000）、细胞分选缓冲液（140-2001） |
| 分选方案 | 小鼠 CD3+ T 细胞无柱阴性分选（免疫磁珠分选），免裂红处理 |
| 样本 | C57 小鼠脾脏细胞（红细胞占比 50%） |
| 起始样本 | 4×10⁷ cells，活性 70% |
| 流式抗体 | CD3-AF647（客户自备） |
| 客户痛点 | 长期使用进口品牌，希望验证国产方案的性价比与稳定性 |
本次 Demo 做了小体系与放大体系两次分选，均未做红细胞裂解前处理，样本制备完成后直接进入磁珠分选流程。分选前后关键指标如下：
| 指标 | 分选前 | 分选后 |
|---|---|---|
| 细胞活性 | 70% | 90% |
| 红细胞占比 | 50% | 无 |
| CD3+ T 细胞占比 | 22.56% | 98.89%（流式纯度） |
| 磁珠残留 | — | 无 |
表中斜杠前后分别为小体系（起始 1×10⁷ cells）与放大体系（起始 4×10⁷ cells）两次实验的数值。
目的细胞本底 22.56%，红细胞占了一半，全程没做裂红前处理，样本制备完直接上机分选，最终流式纯度做到 98.89%。这个数值与客户此前使用进口方案的结果处于同一水平。
起始活性只有 70%，分选后反而升到 90%。阴性分选过程中，死细胞会随磁珠-杂细胞复合物一起被磁力架吸走，所以上清里的活细胞比例自然上升。加上免裂红方案省去了裂解这一步，少了额外操作环节，对细胞状态也有帮助。
50% 的红细胞在阴性分选体系里同样被当作杂细胞标记、去除，收集到的细胞沉淀中看不到红细胞。另一方面，磁珠被磁力架吸附在管壁上，倾倒时没有随上清流出，沉淀里也没有磁珠残留。两个环节各管一头，合起来才是"干净"。
这次实验不仅验证了分选纯度，也让客户看到了国产供应链的成本优势。试剂盒与配套磁力架配合使用，跑出了与进口品牌同一水平的数据，而整体成本明显更低。课题组老师表示，既然国产方案能拿到同等效果，后续不必再额外采购高价进口设备，性价比上确实有优势。
提示：免裂红处理省去了额外操作步骤，但样本全程需使用不含钙镁离子、不含生物素的缓冲液。以下按说明书标准体系（100 μL 细胞悬液 / 1×10⁷ cells）列出操作步骤，起始细胞量更大时各试剂按比例放大，体系体积不超过 2.5 mL。样本量大时，磁力架静置时间要给足。
取 C57 小鼠脾脏，在 70 μm 细胞筛网上研磨，以预冷的分选缓冲液冲洗，收集细胞悬液于 50 mL 离心管中，500 g 离心 5 min 后弃去上清。无需进行红细胞裂解。
将细胞重悬于分选缓冲液中，调整细胞浓度至 1×10⁸ cells/mL。缓冲液可使用含 1 mM EDTA 和 2% FBS 的 PBS（需 0.22 μm 滤膜过滤除菌），也可直接使用 FiniGet 分必得® 细胞分选缓冲液（140-2001）。
吸取 100 μL 细胞悬液（1×10⁷ cells）加至无菌流式管底部，加入 5 μL Mouse FcR Blocker，轻轻混匀。说明书标注此步为非必需流程，可根据样本情况选择执行，本次 Demo 使用了该试剂。
加入 10 μL FiniGet 分必得® Mouse CD3+ T Cell Isolation Cocktail，轻轻混匀，室温孵育 10 min。
孵育完成后，加入 7.5 μL FiniGet 分必得® Streptavidin Beads，轻轻混匀，室温孵育 2.5 min。磁珠使用前需在涡旋震荡仪上充分混匀约 30 s。
孵育完成后，加入分选缓冲液将体积补至 2.5 mL，使用移液器轻轻吹打几次，然后将流式管置于 单孔磁力架（140-2000） 上静置 2.5 min。
拿起磁力架，将细胞悬液轻柔、连贯地倾倒于无菌离心管中，磁极及流式管在倾倒状态下保持 2-3 s 后再恢复正立。倾倒过程中流式管不能脱离磁力架，也不要让管口碰到仍挂在管壁上的液滴。此细胞悬液中即包含纯化的小鼠 CD3+ T 细胞。
免裂红，省时也少一层扰动。常规流程里，裂红会多出加液、孵育、离心、洗涤几个环节，每一步都可能带走一部分细胞。本次全程走物理研磨加离心，不做裂红，流程更短，细胞经历的操作也更少。
好马配好鞍，试剂和磁力架要配套。专款专用的磁力架，磁极位置和流式管贴合，吸附效率才有保障。本次用的单孔磁力架成本也明显低于同类进口设备。
样本活性低，更要防非特异粘附。死细胞会非特异吸附磁珠，操作要轻柔，全程保持低温，减少细胞在室温下停留的时间。
A：可以。本次 Demo 中，面对活性 70%、红细胞 50% 的样本，采用免裂红方案，FiniGet 分必得® 拿到 98.89% 的纯度和 90% 的活性。数据表现与客户此前使用的进口方案处于同一水平，整体成本更低，是一条值得评估的路线。
A：可以。本次 Demo 未做裂红直接分选，分选后沉淀中未见红细胞。阴性分选的 Cocktail 会把红细胞一并作为杂细胞标记，随磁珠复合物被磁力架吸附去除。免裂红不仅省时，也省去了裂解相关的几轮离心和洗涤。
A：关键是控制死细胞的非特异吸附。操作应迅速，全程在冰上或 4℃ 进行，减少细胞在室温暴露的时间。另外，磁珠孵育后的静置时间要给足，避免磁珠-杂细胞复合物没被吸住就随上清倒出。
A：可以。阴性分选获得的细胞表面不带磁珠、也未被抗体标记，表面标志物未被占据，不触发表面受体交联，适合下游的细胞培养、共培养或功能检测。若需激活或极化，再按实验设计补加相应刺激条件即可。
A：细胞分选需要均匀且足够强的磁场。样本量加大时，如果磁力不够，磁珠-杂细胞复合物容易随上清流出，纯度就会被拉下来。配套的单孔磁力架能覆盖 0.1-2 mL、最多 2×10⁸ cells 的体系，吸附效率有保障，成本也明显低于同类进口设备。
面对起始活性仅 70%、红细胞占比 50% 的脾脏样本，FiniGet 分必得® 无柱阴性分选试剂盒（130-6001） 采用免裂红方案，交出了纯度 98.89%、活性 90% 的结果。这次 Demo 一方面验证了国产试剂在高背景样本上的分选表现，另一方面也让客户算清了成本这笔账。好用、省事、成本可控，国产分选方案正在被更多实验室纳入评估。
信天翁生物细胞分选上门实测行动
信天翁生物细胞分选上门实测行动持续面向全国高校、医院、科研实验室开放免费预约，技术人员上门演示FiniGet分必得®全系分选试剂盒标准化流程，现场出具流式纯度数据，针对纯度不达预期、缓冲液选择不清、样本背景复杂、新手首次操作等高频痛点提供落地实操优化方案。更多Demo实测案例与试剂盒详情，详见 FiniGet 分必得® 产品线。
咨询热线：400-090-1923
免责声明：本文数据来自广州医科大学番禺校区线下 Demo 实测，批次 G260728。不同样本类型、起始细胞量与操作条件可能导致结果差异，文中数据仅代表本次实验情况，供参考。
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