目的细胞仅占5%，纯度却做到93.4%？广医二院客户新手带教实录
发布时间:2026-10-27
做肿瘤免疫、细胞治疗方向的课题，把分选出的 T 细胞和巨噬细胞放在一起共培养，是评估免疫细胞相互作用的一套经典组合。但真正落到实验台上，第一步就卡住的人不少：样本活性不高、杂质偏多，手上又没有流式经验，连纯度是多少都测不出来。
近期，信天翁生物技术人员带着 FiniGet 分必得® 130-6003 小鼠 CD8+ T 细胞分选试剂盒 前往广州医科大学附属第二医院，做了一场线下实操 Demo。客户是零基础的新手，此前没接触过分选实验，流式细胞仪也不会上机，最担心的是做完之后没办法确认纯度。本次实验的下游需求是 CD8+ T 细胞与巨噬细胞共培养。
摆在面前的样本并不理想：起始活性只有 70%，红细胞占比 30%，属于典型的困难样本。技术人员全程陪同客户操作，从样本制备一路做到流式上机，最终拿到纯度 93.4%、活性 90% 的 CD8+ T 细胞。下面是本次 Demo 的实测记录和操作要点。
| 项目 | 信息 |
|---|---|
| 实验地点 | 广州医科大学附属第二医院 |
| 分选方案 | 小鼠 CD8+ T 细胞无柱阴性分选（免疫磁珠法） |
| 实验样本 | C57 小鼠脾脏单细胞悬液，红细胞占比 30% |
| 起始样本 | 1×10⁸ cells，活性 70% |
| 实测试剂盒 | FiniGet 分必得® 小鼠 CD8+ T 细胞分选试剂盒（130-6003） |
| 配套耗材 | GOONIE 140-2001 细胞分选缓冲液、FiniGet 分必得® 140-2000 单孔磁力架 |
| 流式抗体 | 客户自备 |
| 下游实验 | CD8+ T 细胞与巨噬细胞共培养 |
这份样本同时占了三个不利条件：起始活性偏低、红细胞占比高、目的细胞本底低。分选前后的关键数据如下：
| 指标 | 分选前 | 分选后 |
|---|---|---|
| 细胞活性 | 70%（偏低） | 90% |
| CD8+ T 细胞 | 占比约 5%（低丰度） | 流式纯度 93.4% |
| 红细胞 | 占比 30% | 无残留 |
| 磁珠残留 | — | 无残留 |
目的细胞本底只有 5%，红细胞还占了 30%，背景杂得厉害。阴性分选的 Cocktail 会把所有非目标细胞标记出来，靠磁珠一并带走，因此即便靶细胞占比很低，依然能富集到 93.4%。对后续的免疫细胞共培养来说，这个纯度可以满足实验需求。
起始样本活性只有 70%，死细胞不少，分选之后活性不降反升。原因在于阴性分选过程中，死细胞和红细胞会随磁珠-杂细胞复合物被一并吸附去除；同时无柱体系不接触目的细胞，没有过柱的机械剪切，有助于保护细胞状态。
客户此前没碰过分选，也没上过流式。技术人员从样本制备、试剂加入、过磁力架倾倒，到后续的流式上机圈门，全程陪同指导，帮助客户顺利拿到了第一手数据。
30% 的红细胞被有效清除，分选后细胞沉淀干净，没有肉眼可见的红细胞和磁珠残留，细胞可直接进入共培养体系。
以下按说明书标准体系（100 μL 细胞悬液 / 1×10⁷ cells）列出操作步骤。CD8+ T 细胞分选，样本制备和缓冲液选择是关键：死细胞容易非特异性粘附磁珠，样本全程需保持低温；新手倾倒上清时动作要连贯，切勿触碰管壁。
取 C57 小鼠脾脏，在 70 μm 细胞筛网上研磨，以预冷的分选缓冲液冲洗细胞筛网，收集细胞悬液于 50 mL 离心管中，500 g 离心 5 min 后弃去上清。
将细胞重悬于分选缓冲液中，调整细胞浓度至 1×10⁸ cells/mL。分选缓冲液推荐使用含有 1 mM EDTA 和 2% FBS 的 PBS，需预先用 0.22 μm 滤膜过滤除菌；缓冲液中不能含钙离子、镁离子和生物素，也可直接使用 GOONIE 140-2001 细胞分选缓冲液。
吸取 100 μL 细胞悬液（1×10⁷ cells）加至无菌流式管底部，加入 5 μL Mouse FcR Blocker，轻轻混匀。该步骤为说明书标注的可选流程，可按样本情况决定是否执行，本次 Demo 现场使用了该试剂。
加入 10 μL Mouse CD8+ T Cell Isolation Cocktail，轻轻混匀，室温孵育 10 min。
孵育完成后，加入 10 μL Streptavidin Beads，轻轻混匀，室温孵育 2.5 min。磁珠使用前需在涡旋震荡仪上充分混匀约 30 s，混匀后不可高速离心。
孵育完成后，加入分选缓冲液将体积补至 2.5 mL，用移液器轻轻吹打几次，再将流式管置于磁力架上静置 2.5 min。实验体系不要超过 2.5 mL，以免超出磁极的分选范围。
拿起磁力架，将细胞悬液轻柔、连贯地倾倒于无菌离心管，磁极及流式管在倾倒状态下保持 2-3 s 后再恢复正立。此细胞悬液中即包含纯化的小鼠 CD8+ T 细胞。
磁力架静置时间要足。新手常因为心急，静置时间不够就倾倒上清，磁珠-杂细胞复合物还没充分吸附，就跟着上清倒进了收集管。建议严格按说明书时间执行；如果需要同时处理多个样本，可选用八连排磁力架（140-2002）提高吸附效率。
倾倒动作要连贯，切勿触碰管壁。倾倒时流式管不能脱离磁力架，动作轻柔连贯。不要让枪头或管口碰到挂在管壁上的液滴，这个液滴应当丢弃，否则会把贴壁的磁珠颗粒带出来。
新手测纯度，圈门策略很关键。客户不会上流式，技术人员现场指导了设门思路：先用 FSC/SSC 圈出淋巴细胞群，再选单细胞群，排除碎片和死细胞，再用 CD8 抗体设门。清晰的圈门策略是拿到准确纯度数据的前提。
做好防污染，保护共培养体系。下游是细胞共培养，整个分选过程需要在无菌环境中完成。收集到的目的细胞建议洗涤后重悬于培养基中，尽快进入后续实验。
A：本次 Demo 起始活性 70%，分选后纯度仍达到 93.4%。阴性分选过程中，磁珠-杂细胞复合物被磁力架吸附去除，死细胞和杂细胞同步被清除，所以分选后活性反而提升到 90%。不过起始活性过低（比如低于 60%）会明显增加非特异粘附的风险，建议尽量保证样本新鲜、操作迅速。分选结果也会受小鼠个体状态、脾脏细胞活性、操作手法影响，存在合理波动。
A：可以。阴性分选的 Cocktail 标记的是所有非目标细胞，只要抗体-磁珠体系能有效结合并去除非目标细胞，目的细胞就能被富集出来。本次 Demo 目的细胞占比约 5%，最终纯度 93.4%。需要注意的是，本底越低，杂细胞的绝对数量越大，对磁珠用量和静置时间的要求就越严格，建议不要压缩孵育和静置时长。
A：新手的问题集中在混匀。混匀抗体和磁珠的时候注意轻柔，不要吹打出气泡。另一个高频卡点是流式上机和圈门，不会设门就拿不到可信的纯度数据。建议新手首次操作时接受技术人员现场指导，把流程跑通一遍再独立操作。
A：可以。无柱阴性分选得到的小鼠 CD8+ T 细胞，表面不带磁珠、也未被抗体标记，不触发表面受体交联，可以直接用于与巨噬细胞的共培养及后续功能检测。本次分选后活性 90%，满足共培养对细胞状态的基本要求。若下游涉及长期培养或激活实验，建议洗涤后重悬于完全培养基中。
A：不需要。130-6003 的样本制备走的是 70 μm 筛网研磨加 500 g 离心弃上清的物理路线，使用前无需裂红处理。本次 Demo 样本红细胞占比达到 30%，分选后细胞沉淀中无红细胞残留，说明阴性分选体系本身就能把红细胞随杂细胞一并带走，既减少了操作步骤，也避免了裂解试剂对细胞活性的影响。如果碰到红细胞占比更高的特殊样本，可以联系技术人员一起评估处理方案。
起始活性只有 70%、红细胞占 30%、目的细胞仅 5%，这样一份困难样本，FiniGet 分必得® 130-6003 交出的结果是纯度 93.4%、活性 90%。在广州医科大学附属第二医院的这场 Demo 里，分必得® 帮客户跨过了分选这道门槛，也把流式上机这一步带完了，为后续的共培养实验打下了基础。
FiniGet分必得®细胞分选上门实测行动
FiniGet 分必得® 细胞分选上门实测行动持续面向全国高校、医院、科研实验室开放免费预约，技术人员上门演示全系分选试剂盒的标准化流程，现场出具流式纯度数据，针对缓冲液选择不清、低丰度样本纯度不足、新手首次操作等高频痛点提供落地实操优化方案。更多 Demo 实测案例与试剂盒详情，详见 FiniGet 分必得® 细胞分选产品全集。
咨询热线：400-090-1923
免责声明：本文全部数据来自广州医科大学附属第二医院线下 Demo 实测，批次 G260911。分选纯度、细胞收获量与活性会受小鼠个体状态、脾脏细胞活性、操作人员手法等因素影响，存在合理波动。FiniGet 分必得® 130-6003 试剂盒仅用于科研实验，不可用于临床诊断。
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