AF647 Rat Anti-mouse CD19 Antibody（6D5）
一键复制信息
- 产品描述
- 组成成分
- 注意事项
-
TL;DR：NeoMab 26-2019-1 AF647 标记大鼠抗小鼠 CD19 单克隆抗体（6D5 克隆），特异性识别小鼠 CD19 分子，标记小鼠 B 细胞（从 pro-B 到 mature B 全阶段）及滤泡树突状细胞；抗体浓度 0.5 mg/mL，推荐用量 ≤0.25 µg/百万细胞；红光（633 nm）激发，发射波长 664 nm；适用于流式细胞术（Flow Cytometry）检测小鼠 B 细胞；2-8℃ 避光保存，两年有效。
应用领域：小鼠 B 细胞鉴定与定量、B 细胞发育与分化研究、B 细胞恶性肿瘤模型免疫分型、自身免疫病模型（CIA/SLE）B 细胞监测、B 细胞靶向治疗（抗 CD19/CAR-T）疗效评估、疫苗免疫应答中 B 细胞应答分析、多色 Panel 中 B 细胞标记（AF647 通道与 FITC/PE 兼容性极佳）。
一、产品规格总表
参数 详情 产品名称 AF647 Rat Anti-mouse CD19 Antibody (6D5) 货号 26-2019-12（25 µg）/ 26-2019-15（100 µg） 克隆号 6D5 宿主 / 亚型 Rat IgG2a, κ 偶联物 AF647（Allophycocyanin 647） 种属反应性 Mouse（小鼠） 验证应用 Flow Cytometry（流式细胞术） 激发 / 发射波长 648 nm / 664 nm 激发激光器 Red Laser（633 nm） 抗体浓度 0.5 mg/mL 推荐用量 ≤ 0.25 µg / 百万细胞（100 µL 染色体积） 保存条件 2-8℃ 避光保存，两年有效；冰袋运输
二、靶标背景 · 小鼠 CD19
小鼠 CD19 是分子量约 95 kDa 的糖蛋白，又称 B4，属于免疫球蛋白超家族（IgSF）成员，由 Cd19 基因编码，Gene ID: 12478。CD19 是小鼠 B 细胞谱系最经典的表面标记物之一，表达于从 pro-B 到 mature B 细胞的所有发育阶段，但在终末分化的浆细胞（plasma cell）表面不表达。CD19 也表达于滤泡树突状细胞（FDC）。
CD19 在小鼠 B 细胞表面与 CD21 和 CD81 形成分子复合物，作为 BCR 的共受体（co-receptor），参与 B 细胞的活化调控。CD19 胞内段含有多个酪氨酸磷酸化位点，可募集多种信号分子，显著增强 BCR 信号转导效率，对 B 细胞的发育、活化和分化起关键调控作用。
表达分布：小鼠 B 细胞谱系各阶段（pro-B → immature B → mature B → B1/B2），滤泡树突状细胞（FDC）。不表达于 T 细胞、NK 细胞、巨噬细胞、粒细胞及浆细胞。小鼠脾脏 B 细胞（B2 为主）约占淋巴细胞总数的 40-50%，腹腔 B1 细胞占 10-20%。
别名：B4
Gene ID：12478（Mouse）
分布：B 细胞（pro-B 至 mature B 全阶段）、滤泡树突状细胞（FDC）；浆细胞不表达
三、克隆号信息 · 6D5
6D5 是抗小鼠 CD19 广泛使用的大鼠单克隆抗体克隆号，特异性识别小鼠 CD19 分子胞外段。6D5 在小鼠免疫学研究中广泛用于 B 细胞鉴定和定量，是小鼠 B 细胞分型方案中的核心抗体之一。
克隆比较：小鼠 CD19 的常用克隆还包括 1D3 等。6D5 的优势在于：① 识别表位稳定，批间一致性好；② 与多种荧光素偶联兼容，适合多色 Panel；③ 在小鼠 B 细胞恶性肿瘤模型（如 Eμ-Myc、Eμ-TCL1）中验证良好。1D3 在某些研究中表现出更高的荧光信号强度，但 6D5 的文献覆盖更为全面。
典型应用：小鼠脾脏/骨髓/外周血 B 细胞定量、B 细胞发育阶段分析（pro-B → pre-B → immature B → mature B）、B1 vs B2 细胞分型、B 细胞恶性肿瘤模型免疫分型、B 细胞耗竭实验验证（如抗 CD20 治疗后 B 细胞清除效果）、疫苗免疫应答中 B 细胞应答评估。
四、荧光素信息 · AF647
AF647（Allophycocyanin 647）是流式细胞术中常用的高亮度红色荧光染料，基于藻蓝蛋白（C-phycocyanin）衍生，激发峰 648 nm、发射峰 664 nm，由 633 nm 红光激光器激发。AF647 的量子产率高、光稳定性好，是 APC 的同系荧光素，二者光谱特性非常接近。
光谱特征：
参数 数值 激发波长 648 nm 发射波长 664 nm（远红色） 激光器 Red Laser（633 nm） 检测通道 APC-A / FL4（660/20 nm 滤光片） Stokes 位移 ~16 nm
小鼠免疫 Panel 搭配建议：AF647 发射峰尖锐（664 nm），与 FITC（526 nm）和 PE（578 nm）光谱溢出极小，是多色 Panel 的理想末端通道荧光素。小鼠 B 细胞检测常见搭配：
• AF647-CD19 + FITC-B220 + PE-IgM → B 细胞发育阶段分析（immature IgM- vs mature IgM+）
• AF647-CD19 + FITC-CD4 + PE-CD8 → T/B 细胞全免疫分型（三标记 Panel）
• AF647-CD19 + PE-CD5 → B1 vs B2 细胞分型（CD19+CD5+ → B1a 细胞）
• AF647-CD19 + FITC-IgM + PE-IgD → B 细胞成熟度分析（IgM+IgD- → immature / IgM+IgD+ → mature）
• AF647-CD19 + PE-CD138 → B 细胞 vs 浆细胞分型（CD19+CD138- → B / CD19-CD138+ → plasma cell）
• AF647-CD19 + FITC-GL7 + PE-Fas → 生发中心 B 细胞鉴定（GC B cells）注意事项：AF647 光稳定性好，但长时间暴露于强光仍可能淬灭，操作过程注意避光。AF647 与 APC 的发射光谱重叠较大（均约 660 nm 区域），同一 Panel 中不能同时使用 AF647 和 APC 标记的抗体。AF647 在酸性条件（pH < 4）下可能发生解离，确保染色缓冲液 pH 在 7.0-7.4。
五、流式染色 Protocol
所需试剂：
• NF0003 细胞染色缓冲液（PBS + 0.5-1% BSA + 0.05% NaN₃）
• NF0004-5 7-AAD 溶液（死细胞排除）
• Fc 受体封闭试剂（含单核/巨噬/B/NK 细胞样本推荐添加）
• 红细胞裂解液（全血样本选做）
操作步骤：
Step 1 · 制备单细胞悬液
收集所需组织（如脾脏、淋巴结、骨髓、腹腔灌洗液），在细胞染色缓冲液（NF0003）中制备单细胞悬液。如果是体外培养的细胞，用染色缓冲液洗涤一次并重悬。调整细胞浓度为 5-10 × 10⁶ cells/mL，分装 100 µL/tube（5-10 × 10⁵ cells/tube）。
Step 2 · Fc 受体封闭
小鼠 B 细胞表面表达 Fc 受体（FcγR），会与抗体 Fc 段非特异性结合，影响实验结果。推荐使用小鼠 Fc 受体封闭试剂，每管加入 5 µL，室温孵育 5-10 min，不用洗涤。
Step 3 · 抗体染色
每管加入适量流式抗体（按照 ≤ 0.25 µg/百万细胞 in 100 µL volume），轻轻混匀，冰上避光孵育 20-30 min。不同样本建议做滴定实验确定最适浓度。
Step 4 · 洗涤
用 1 mL 细胞染色缓冲液洗涤 1 次。
Step 5 · 7-AAD 活性染料染色（选做）
重悬细胞于 0.1 mL 染色缓冲液，每百万细胞加入 5 µL（0.25 µg）7-AAD Solution（NF0004-5），用于排除死细胞。此步根据实际情况选做。
Step 6 · 孵育
冰上避光孵育 5-10 min。
Step 7 · 洗涤
用 1 mL 细胞染色缓冲液洗涤 1 次。
Step 8 · 上机检测
细胞重悬于 200-300 µL 细胞染色缓冲液中，上机测试。如不能及时测试，保存于 4℃ 并于 4 小时内完成检测。AF647 通道选择 APC-A / FL4（660/20 nm）。
注意事项：使用前快速离心抗体管回收管壁上的抗体；不同样本建议做滴定实验确定最适浓度；全血样本需根据需求选购合适的红细胞裂解液并按说明书操作；本产品仅用于科研，请勿用于体外诊断。
六、对照设置指南
对照类型 用途与说明 空白对照（未染色） 评估细胞自发荧光，用于调节 PMT 电压 单染/单阳性对照 多色 Panel 中用于调节荧光补偿，每种荧光素各设一管 同型对照 AF647 标记的 Rat IgG2a, κ 同型抗体，消除非特异性背景染色。6D5 为 Rat IgG2a, κ 亚型，同型对照的宿主、亚型和偶联物需完全一致 FMO 对照（Fluorescence Minus One） 多色 Panel 中去除某一种荧光素，用于准确设门，特别是 CD19 弱表达群体（如 pro-B 细胞）
提示：CD19 在小鼠成熟 B 细胞上表达丰度高，阳性峰与阴性峰分离明显，基础鉴定可不设同型对照；但若用于 pro-B 细胞（CD19 dim）或 B 细胞发育分析中的早期阶段，同型对照推荐设置。
七、质量数据与参考文献
每批产品均经过严格质控，流式细胞术验证对小鼠 CD19+ B 细胞的特异性染色性能，确认抗体效价、荧光素偶联效率及无菌性。批间一致性保证实验可重复性。
流式染色结果示例：C57BL/6 小鼠脾细胞经 CD19（6D5）AF647 染色（填充直方图）vs 阴性对照（开放直方图），可在 APC 通道（Red Laser, 660/20 nm）检测到明显的 CD19+ B 细胞群。
参考文献：
1. Tedder TF, et al. Proc Natl Acad Sci USA. 1986;83(17):6509-6513.（小鼠 CD19 分子鉴定）
2. Bradbury LE, et al. J Immunol. 1992;149(9):2979-2988.（小鼠 CD19 信号调控机制）
3. Rickert RC, et al. Curr Opin Immunol. 2013;25(3):318-325.（小鼠 B 细胞发育综述）
4. Hardy RR, et al. Adv Immunol. 1991;49:239-267.（小鼠 B 细胞发育阶段分类，Hardy 分型）
5. Martin F, et al. Nat Rev Immunol. 2001;1(3):197-205.（B1 vs B2 细胞功能差异）
八、相关产品
同靶标 · 不同荧光素（小鼠 CD19，6D5 克隆）：
• 11-2019-12 FITC Rat Anti-mouse CD19 (6D5) — FITC 标记，Ex/Em 498/526 nm，Blue Laser
人 CD19 检测：
• 11-1019-12 FITC Mouse Anti-human CD19 (4G7) — 人 CD19 检测用，4G7 克隆
B 细胞 Panel 常用搭配：
• 26-2019-12 AF647 Rat Anti-mouse CD19 (6D5) — 本页产品，B 细胞标记
• 11-2004-12 FITC Rat Anti-mouse CD4 (GK1.5) — T 细胞标记（CD4 vs CD19 区分 T/B）
• 12-2003-1 PE Rat Anti-mouse CD8a (53-6.7) — CD8+ T 细胞标记（经典三标记 Panel）
配套试剂：
• NF0003 细胞染色缓冲液 — PBS + BSA + NaN₃，流式染色专用
• NF0004-5 7-AAD 溶液 — 死细胞排除染料
九、常见问题 · FAQ
Q: 26-2019-12 的同型对照选什么？
A: 选择 AF647 标记的 Rat IgG2a, κ 同型抗体。6D5 是 Rat IgG2a, κ 亚型，同型对照的宿主、亚型和偶联物需完全一致。
Q: AF647 和 APC 有什么区别？可以互相替代吗？
A: AF647 和 APC 的光谱特性非常接近（激发/发射均约 650/660 nm 区域），使用相同的红光激光器（633 nm）激发，检测通道均为 APC-A/FL4。主要区别：AF647 基于小分子有机荧光素，批次间一致性更好，光稳定性略优于 APC（蛋白质类）；APC 基于藻蓝蛋白，分子量较大，在某些偶联场景中标记效率不同。同一 Panel 中不能同时使用 AF647 和 APC（光谱严重重叠）。如果已有 APC 标记的抗体方案，替换为 AF647 时补偿设置基本不变。
Q: AF647-CD19 和 FITC-CD19（11-2019-12）怎么选？
A: 两者靶标相同（CD19）、克隆相同（6D5），区别仅在荧光素。AF647 在红光通道，与 FITC/PE 光谱溢出最小，补偿最简单。另外 AF647 的亮度更高，适合检测 CD19 弱表达群体（如 pro-B 细胞）。
Q: 小鼠 CD19 和人 CD19 有什么区别？可以用 11-1019-12（4G7）检测小鼠 B 细胞吗？
A: 小鼠 CD19 和人 CD19 虽然功能相似（都是 BCR 共受体），但分子结构不同，人 CD19 抗体（4G7）不能交叉反应检测小鼠 CD19。小鼠 B 细胞必须使用抗小鼠 CD19 抗体（如 6D5，即 11-2019-12 或 26-2019-12），人 CD19 则使用抗人 CD19 抗体（如 4G7，即 11-1019-12）。
Q: 小鼠脾脏中 B 细胞正常比例是多少？
A: C57BL/6 小鼠脾脏淋巴细胞中，CD19+ B 细胞约占 40-50%（绝对计数约 2-4 × 10⁷/脾）。BALB/c 小鼠 B 细胞比例略高。腹腔灌洗液中 B1 细胞（CD19+CD5+）约占 10-20%。骨髓中 pro-B/pre-B 细胞（CD19+IgM-）比例较高，而成熟 B 细胞（CD19+IgM+）较少。
Q: 做 B 细胞和浆细胞分型怎么搭配？
A: 经典方案：AF647-CD19 + PE-CD138（Syndecan-1）。CD19+CD138- → B 细胞；CD19-CD138+ → 浆细胞；CD19+CD138+ → 浆母细胞（plasmablast，过渡态）。注意浆细胞不表达 CD19（从 mature B 终末分化后丢失 CD19），因此 CD19 阴性不代表分选失败，而是浆细胞的正常特征。
十、技术支持
NeoMab 隶属信天翁生物科技（广州）有限公司，专注于流式抗体和免疫学试剂研发。
• 客服电话：400-090-1923
• 技术支持邮箱：service@gooniebio.com
• 公司官网：www.gooniebio.com
• 地址：广州市黄埔区瑞和路39号纳金科技园
页面总结：NeoMab 26-2019-1 AF647 Rat Anti-mouse CD19 Antibody（6D5），特异性识别小鼠 CD19 分子（95 kDa），标记小鼠 B 细胞（pro-B 至 mature B 全阶段，浆细胞不表达），0.5 mg/mL 抗体浓度，≤0.25 µg/百万细胞推荐用量，Rat IgG2a,κ 亚型，AF647 红光（633 nm）激发发射 664 nm，2-8℃ 避光保存两年有效，广泛用于小鼠 B 细胞鉴定与定量、B 细胞发育分析、B1/B2 分型、多色 Panel 中 B 细胞标记（与 FITC/PE 兼容性极佳）等科研领域。
-
保存：2-8℃避光保存。冰袋运输。
关键词
产品推荐
PE Rat Anti-mouse CD8a Antibody（53-6.7）
货号：12-2008A-1
应用：FC
种属反应性：Mouse
宿主种属：Rat
PE/Cy7 Rat Anti-mouse CD8a Antibody（53-6.7）
货号：15-2008A-1
应用：FC
种属反应性：Mouse
宿主种属：Rat
APC Rat Anti-mouse CD8a Antibody（53-6.7）
货号：16-2008A-1
应用：FC
种属反应性：Mouse
宿主种属：Rat
AF488 Rat Anti-mouse CD8a Antibody（53-6.7）
货号：21-2008A-1
应用：FC
种属反应性：Mouse
宿主种属：Rat
AF647 Rat Anti-mouse CD8a Antibody（53-6.7）
货号：26-2008A-1
应用：FC
种属反应性：Mouse
宿主种属：Rat
PE anti-GGGGS Linker Antibody（RAGS-23）
货号：12-7007-1
应用：FC
种属反应性：GGGGS Linker
宿主种属：Rabbit
提交您的留言
如果您对我们的产品感兴趣，请留下您的电子邮件地址，我们将尽快与您联系。谢谢！
小红书
抖音
公众号
积分商城
广州市黄埔区瑞和路39号G5座321-332号
客服二维码
