AF647 Rat Anti-mouse IFN-gama Antibody（XMG1.2）
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TL;DR：NeoMab 26-27005-1 AF647 标记大鼠抗小鼠 IFN-γ 单克隆抗体（XMG1.2 克隆），特异性识别小鼠干扰素-γ（IFN-γ），用于流式细胞术胞内因子染色检测活化的 T 细胞及 NK 细胞；抗体浓度 0.5 mg/mL，推荐用量 ≤0.25 µg/百万细胞；红光（633 nm）激发，发射波长 664 nm；适用于 Flow Cytometry 胞内细胞因子检测；2-8℃ 避光保存，两年有效。
应用领域：Th1 细胞功能鉴定（IFN-γ 为 Th1 标志性细胞因子）、CD8+ T 细胞效应功能评估、NK 细胞活化检测、肿瘤免疫微环境分析、感染免疫应答监测、疫苗免疫原性评价、自身免疫病模型（EAE、CIA）效应 T 细胞分析。
一、产品规格总表
参数 详情 产品名称 AF647 Rat Anti-mouse IFN-γ Antibody (XMG1.2) 货号 26-27005-12（25 µg）/ 26-27005-15（100 µg） 克隆号 XMG1.2 宿主 / 亚型 Rat IgG1, κ 抗体类型 Monoclonal Antibody（单克隆抗体） 偶联物 AF647（Alexa Fluor 647） 种属反应性 Mouse（小鼠） 验证应用 Flow Cytometry（流式细胞术，胞内因子染色） 激发 / 发射波长 648 nm / 664 nm 激发激光器 Red Laser（633 nm） 抗体浓度 0.5 mg/mL 推荐用量 ≤ 0.25 µg / 百万细胞（100 µL 染色体积） 保存条件 2-8℃ 避光保存，两年有效；冰袋运输
二、靶标背景 · 小鼠 IFN-γ
小鼠 IFN-γ（Interferon-gamma，干扰素-γ）是一种多功能细胞因子，主要由活化的 NK 细胞和 T 细胞（特别是 Th1 细胞和 CD8+ 效应 T 细胞）分泌，Gene ID: 15978。IFN-γ 最初因抗病毒活性被鉴定，后被证实具有抗增殖、免疫调节和促炎活性，是适应性免疫和固有免疫之间的关键桥梁分子。
IFN-γ 可上调抗原递呈细胞（APC）的 MHC I 类和 II 类抗原表达，激活巨噬细胞经典活化途径（M1 极化），促进 Th1 型免疫应答，同时抑制 Th2 型应答。在肿瘤免疫中，IFN-γ 是抗肿瘤免疫应答的核心效应分子；在自身免疫病中，IFN-γ 过度产生与多种病理过程相关。
主要来源细胞：活化的 Th1 细胞（CD4+）、效应 CD8+ T 细胞（Tc1）、活化的 NK 细胞、NKT 细胞。
别名：Interferon-γ、Immune interferon、Type II interferon、T cell interferon、Macrophage-activating factor (MAF)
Gene ID：15978（Mouse）
功能分类：II 型干扰素、Th1 标志性细胞因子
三、克隆号信息 · XMG1.2
XMG1.2 是抗小鼠 IFN-γ 最经典、引用最广泛的大鼠单克隆抗体克隆号之一，由 Vacchio 等人建立。XMG1.2 特异性识别小鼠 IFN-γ 蛋白，不与小鼠 IFN-α/β 及其他细胞因子交叉反应，广泛用于流式细胞术胞内因子染色（ICS）检测活化的 T 细胞和 NK 细胞。
典型应用：PMA/Ionomycin 刺激后小鼠脾细胞/淋巴结细胞中 Th1 细胞频率检测（IFN-γ+CD4+）、CD8+ Tc1 细胞效应功能评估（IFN-γ+CD8+）、NK 细胞活化检测（IFN-γ+NKp46+）、感染模型（李斯特菌、结核分枝杆菌、疟原虫等）特异性 T 细胞应答监测、肿瘤疫苗免疫原性评价、自身免疫病模型（EAE、CIA）效应 T 细胞分析。
注意：IFN-γ 为胞内合成、分泌型细胞因子，检测时必须进行胞内染色（intracellular staining），需先将细胞固定并破膜后才能与抗体结合，不能直接用于活细胞表面染色。
四、荧光素信息 · AF647
AF647（Alexa Fluor 647）是流式细胞术中常用的远红光荧光染料，激发峰 648 nm、发射峰 664 nm，由 633 nm 红光激光器激发，具有极高的光稳定性和量子产率。
光谱特征：
参数 数值 激发波长 648 nm 发射波长 664 nm（远红光） 激光器 Red Laser（633 nm） 检测通道 APC-A / FL4（670/30 nm 滤光片） Stokes 位移 ~16 nm
胞内因子 Panel 搭配建议：AF647 发射光谱窄、光稳定性强，非常适合多色胞内因子染色 Panel：
• FITC-CD4 + PE-IFN-γ + APC-IL-4 → 经典 Th1/Th2 胞内因子分型（此时 IFN-γ 用 PE 标记更合适）
• FITC-CD4 + APC-IFN-γ + PE-IL-17A → Th1/Th17 胞内因子分型
• PerCP-CD8 + AF647-IFN-γ → CD8+ Tc1 效应功能检测（双色方案）
• FITC-CD3 + PE-NKp46 + AF647-IFN-γ → NK 细胞功能检测
• FITC-CD4 + PE-CD44 + APC-CD62L + AF647-IFN-γ → Memory T 细胞效应功能分析注意事项：AF647 的光稳定性显著优于 PE 和 FITC，适合长时间采集和多色实验；AF647 与 APC 光谱接近（均使用 633 nm 红光激光激发），不可用于同一 Panel（本产品的 AF647-IFN-γ 与 APC 标记抗体存在光谱冲突，需选择其他荧光素替代或调整 Panel 设计）。
五、胞内因子染色 Protocol
所需试剂：
• 小鼠表面标记抗体（如 FITC-CD3、PE-CD4、PerCP-CD8 等）
• 抗小鼠 IFN-γ AF647 荧光流式抗体（本产品 26-27005-1）
• 刺激剂：PMA + Ionomycin 混合液
• 蛋白转运抑制剂：Brefeldin A (BFA)
• 细胞内固定 & 破膜液试剂盒
• 流式染色缓冲液（PBS + 0.5-1% BSA + 0.05% NaN₃）
操作步骤：
Part A · 细胞刺激
Step 1 · 在 12 孔板中加入小鼠脾脏细胞，调整细胞浓度至 1-2 × 10⁶ cells/孔，加入 PMA（工作浓度 20 ng/mL）和 Ionomycin（工作浓度 1 µg/mL），混匀后放入 37℃ 细胞培养箱静置 1 小时。
Step 2 · 每孔加入 BFA（工作浓度 10 µg/mL），混匀后放入 37℃ 细胞培养箱静置 4 小时。
Part B · 细胞表面抗原染色
Step 3 · 刺激结束后，收集细胞并用流式染色缓冲液洗涤一次（室温 400-600 × g 离心 5 分钟，弃上清）。
Step 4 · 加入 100 µL 流式染色缓冲液重悬细胞，加入表面标记抗体，4℃ 避光孵育 20-30 分钟。
Step 5 · 加入 1 mL 流式染色缓冲液，洗涤细胞一次。
Part C · 固定与破膜处理
Step 6 · 选用细胞内固定 & 破膜液试剂盒，并根据说明书操作。
Part D · IFN-γ 胞内染色
Step 7 · 加入 100 µL 1X 破膜剂重悬细胞，加入 AF647 标记的 XMG1.2 抗体（本产品），室温避光孵育 20-60 分钟。
Step 8 · 加入 2 mL 1X 破膜液，室温 400-600 × g 离心 5 分钟，弃上清。
Step 9 · 用 200-300 µL 流式细胞染色缓冲液重悬染色的细胞。
Step 10 · 使用流式细胞仪分析样本。AF647 检测通道选择 FL4（670/30 nm）。
对照类型 用途与说明 空白对照 用于调节 PMT 电压 单染/单阳性对照 用于调节荧光补偿 同型对照 消除背景染色干扰：AF647 标记的 Rat IgG1, κ 同型抗体 FMO（荧光扣除）对照 确定设门的准确性，特别是 IFN-γ 弱阳性群体
注意事项：
• 使用前，快速离心抗体管，回收管壁上的抗体。
• 流式抗体使用浓度，对于不同样本可做滴定实验，以确定最适浓度。
• 如果是全血样本，则根据需求选购合适的红细胞裂解液，并根据其说明书操作。
• 本产品仅用于科研，请勿用于体外诊断。
六、流式结果示例
PMA/Ionomycin 刺激（5 小时）C57BL/6 小鼠脾细胞，经 XMG1.2 AF647 染色。XMG1.2 AF647 抗体依次滴定（从左至右：0、0.0625、0.125、0.25、0.5 µg），可清晰观察到 IFN-γ 阳性细胞群随抗体浓度增加信号增强。
七、质量数据与参考文献
每批产品均经过严格质控，流式细胞术验证对 PMA/Ionomycin 刺激的小鼠脾细胞中 IFN-γ 阳性细胞群的特异性染色性能，确认抗体效价、荧光素偶联效率及无菌性。批间一致性保证实验可重复性。
参考文献：
1. Vacchio MS, et al. J Exp Med. 1991;173(6):1437-1444.（XMG1.2 克隆的建立与小鼠 IFN-γ 检测）
2. Schoenborn JR, Wilson CB. Adv Immunol. 2006;89:115-159.（IFN-γ 基因调控与表达机制综述）
3. Schroder K, et al. Immunity. 2004;20(2):145-159.（IFN-γ 信号通路与免疫功能）
4. Park H, et al. Nat Immunol. 2011;12(6):483-490.（Th1/Th17 分化与 IFN-γ 产生调控）
5. Cossarizza A, et al. Eur J Immunol. 2019;49(10):1457-1973.（流式细胞术标准操作指南，含胞内因子染色 Protocol）
八、相关产品
同靶标 · 不同荧光素（小鼠 IFN-γ，XMG1.2 克隆）：
• 11-27001-1 FITC Rat Anti-mouse IFN-γ (XMG1.2) — FITC 标记，Ex/Em 498/526 nm，蓝光激发
配套试剂：
• NF0003 细胞染色缓冲液 — PBS + BSA + NaN₃，流式染色专用
• NF0004-5 7-AAD 溶液 — 死细胞排除染料
九、常见问题 · FAQ
Q: 26-27005-1 的同型对照选什么？
A: 选择 AF647 标记的 Rat IgG1, κ 同型抗体。XMG1.2 是 Rat IgG1, κ 亚型，同型对照的宿主、亚型和偶联物需完全一致。Q: 为什么检测 IFN-γ 必须做胞内染色，不能直接染表面？
A: IFN-γ 是分泌型细胞因子，合成后储存在细胞内的分泌囊泡中，只有经 PMA/Ionomycin 刺激并加入 BFA 阻断蛋白分泌后，IFN-γ 才在细胞内大量积累。固定破膜后抗体才能进入细胞内与 IFN-γ 结合。因此必须走完整的刺激→固定→破膜→胞内染色流程。Q: PMA/Ionomycin 刺激的时长和 BFA 浓度怎么优化？
A: 说明书推荐方案为 PMA (20 ng/mL) + Ionomycin (1 µg/mL) 预处理 1 小时，再加 BFA (10 µg/mL) 共孵育 4 小时（总计 5 小时）。若检测信号偏弱，可将总刺激时间延长至 6 小时，但过长刺激会导致细胞活力下降和表面标记丢失，需权衡。BFA 浓度过高也会加速细胞死亡，不建议超过 10 µg/mL。
Q: AF647 和 APC 有什么区别？可以放在一起用吗？
A: AF647 和 APC 的激发波长（633 nm）和发射波长（AF647: 664 nm; APC: 660 nm）极为接近，两者在流式细胞仪上不可区分。因此 AF647 标记的抗体不能与 APC 标记的抗体在同一 Panel 中使用。如需多色搭配，APC 通道请选择其他远红光荧光素（如 APC-Cy7、AF700 等）。
Q: 固定破膜后表面标记信号会减弱吗？
A: 部分表面标记（尤其是某些荧光素偶联物）在固定破膜后信号可能减弱。建议在固定破膜之前完成表面标记染色（Step 4），固定破膜后再进行胞内因子染色（Step 7）。选择经过胞内染色验证的表面抗体（大多数主流克隆均兼容），可保持信号稳定。
十、技术支持
NeoMab 隶属信天翁生物科技（广州）有限公司，专注于流式抗体和免疫学试剂研发。
• 客服电话：400-090-1923
• 技术支持邮箱：service@gooniebio.com
• 公司官网：www.gooniebio.com
• 地址：广州市黄埔区瑞和路39号纳金科技园
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保存：2-8℃避光保存。冰袋运输。
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