FITC Rat Anti-mouse IFN- gamma Antibody（XMG1.2）
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11-27005-1 FITC Rat Anti-mouse IFN-γ Antibody（XMG1.2）：FITC标记大鼠抗小鼠IFN-γ单抗，经典克隆号XMG1.2，适用于流式细胞术胞内细胞因子染色（ICS）检测小鼠IFN-γ表达。常用于Th1/Tc1细胞、NK细胞、CD8+ T细胞等IFN-γ分泌亚群的表型分析。
一、核心参数
参数 规格 货号 11-27005-12（25 µg）/ 11-27005-15（100 µg） 克隆号 XMG1.2 宿主 Rat 反应性 Mouse 同型 Rat IgG1,κ 抗体类型 单克隆抗体（Monoclonal） 结合物 FITC（激发/发射：498/526 nm） 浓度 0.5 mg/mL 用途 Flow Cyt（流式细胞术·胞内细胞因子染色） 建议用量 0.25 µg/10⁶ cells/100 µL Gene ID 15978 其他名称 Interferon-γ, Immune interferon, Type II interferon, T cell interferon 储存条件 2–8°C避光保存，冰袋运输，禁止冻存
二、IFN-γ靶点背景
IFN-γ（干扰素γ/Type II interferon）是一种多效性细胞因子，由小鼠Ifng基因编码，主要由活化的T淋巴细胞和NK细胞分泌，生物活性形式为约45 kDa的同源二聚体。
IFN-γ结合IFN-γ受体复合物（IFNGR1/IFNGR2），激活JAK-STAT信号通路，驱动IFN-γ响应基因转录。功能上，IFN-γ是关键的巨噬细胞激活因子，促进M1极化，增强抗微生物和抗肿瘤活性；同时上调MHC I类和II类分子的抗原提呈能力，在宿主防御胞内病原体感染中起核心作用。
XMG1.2是IFN-γ检测领域的经典验证克隆，被广泛引用在免疫学、感染免疫和肿瘤免疫相关文献中。
三、胞内细胞因子染色（ICS）操作流程
⚠ 注意：IFN-γ是胞内因子，检测必须经过刺激、固定破膜处理。以下流程以12孔板体系为例。
所需材料
- 表面标记抗体（CD3/CD4/CD8等）
- IFN-γ荧光流式抗体
- 刺激剂：PMA + Ionomycin 混合液
- 蛋白转运抑制剂：Brefeldin A（BFA）
- 细胞内固定&破膜液试剂盒
步骤1–2：细胞刺激（12孔板体系）
在12孔板中加入细胞（如脾细胞或PBMC），调整细胞浓度至1–2×10⁶ cells/孔，加入PMA（工作浓度20 ng/mL）和Ionomycin（工作浓度1 µg/mL），混匀后放入37°C细胞培养箱静置1小时。
每孔加入BFA（工作浓度10 µg/mL），混匀后放入37°C细胞培养箱继续孵育4小时。
步骤3–6：细胞表面抗原染色
刺激结束后，收集细胞并用流式染色缓冲液洗涤1次（室温400–600×g离心5分钟，弃上清）。加入100 µL流式染色缓冲液重悬细胞，加入表面标记抗体（如CD3 AF647），4°C避光孵育20–30分钟。加入1 mL流式染色缓冲液洗涤细胞1次。
步骤7：固定与破膜处理
选用细胞内固定&破膜液试剂盒，按说明书操作进行细胞固定和破膜处理。
步骤8–9：IFN-γ胞内染色
加入100 µL 1X破膜剂重悬细胞。加入FITC Rat Anti-mouse IFN-γ Antibody（XMG1.2）（建议0.25 µg/10⁶ cells），室温避光孵育20–60分钟。加入2 mL 1X破膜液，室温400–600×g离心5分钟，弃上清。
步骤10–11：重悬上机
用200–300 µL流式细胞染色缓冲液重悬染色的细胞，使用流式细胞仪分析样本。
四、对照设置参考
对照类型 用途 空白对照 用于调节电压 单染/单阳性对照 用于调节补偿 同型对照 消除背景染色干扰（Rat IgG1,κ FITC） FMO（荧光扣除）对照 确定设门的准确性 未刺激对照 评估基础IFN-γ表达水平，确认刺激有效性
五、分型效果
C57BL/6小鼠脾细胞经CD3 AF647表面染色、PMA+离子霉素刺激后，进行IFN-γ胞内染色（FITC XMG1.2）。CD3+IFN-γ+双阳性细胞群清晰可辨（Q2象限，约4.22%），符合活化T细胞分泌IFN-γ的典型比例。
六、注意事项
1. 使用前，快速离心抗体管，回收管壁上的抗体。
2. IFN-γ是胞内因子，必须经过固定破膜处理才能检测，请使用合适的胞内固定破膜试剂盒。
3. 细胞刺激步骤至关重要：PMA+离子霉素刺激4–6小时，最后4小时必须加入蛋白转运抑制剂（Brefeldin A或Monensin），否则IFN-γ会被分泌到胞外无法检测。
4. FITC荧光素易发生光漂白，染色、孵育及上机等待全过程均需严格避光，样品管建议用锡箔纸包裹，染色后尽快上机检测。
5. FITC通道（FL1）与PE通道（FL2）存在光谱重叠，多色配色时需用单染管做好荧光补偿。
6. 如果是全血样本，则根据需求选购合适的红细胞裂解液，并根据其说明书操作。
7. 本产品2–8°C避光保存，冰袋运输，禁止冻存。
8. 本产品仅用于科研，请勿用于体外诊断。
七、常见问题（FAQ）
Q1：11-27005-1的建议用量是多少？
A：建议用量为0.25 µg/10⁶ cells/100 µL染色体系。不同样本可通过滴定实验确定最适浓度。
Q2：IFN-γ检测为什么需要PMA+离子霉素刺激？
A：IFN-γ是诱导型细胞因子，静息状态下几乎不表达。PMA+离子霉素可模拟TCR信号，激活T细胞和NK细胞分泌IFN-γ。不刺激则检测不到阳性信号。
Q3：为什么必须加蛋白转运抑制剂（Brefeldin A/Monensin）？
A：蛋白转运抑制剂阻断高尔基体到细胞膜的分泌途径，使IFN-γ在胞内积累。如果不加，IFN-γ会被分泌到胞外，胞内染色结果为阴性。
Q4：XMG1.2克隆有什么特点？
A：XMG1.2是IFN-γ检测领域的经典验证克隆，特异性高、背景低，被广泛引用在免疫学、感染免疫和肿瘤免疫相关文献中，是IFN-γ胞内染色的首选克隆之一。
Q5：IFN-γ胞内染色可以用表面染色的流程吗？
A：不可以。表面染色只能检测细胞膜表面标志物，IFN-γ是胞内因子，必须经过固定破膜处理才能检测。请严格按照胞内染色（ICS）流程操作。
八、技术支持
如有任何产品使用或实验设计问题，欢迎联系信天翁生物技术支持团队。
咨询热线：400-090-1923
技术邮箱：service@gooniebio.com
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保存：2-8℃避光保存。冰袋运输。
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