Fast Taq SYBR Green qPCR Mix
Ct值稳定 复孔间重复性好
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- 产品描述
- 组成成分
- 注意事项
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产品：质Fast Taq SYBR Green qPCR Mix
目录价：500
品牌：GOONIE
货号：500-102
规格：500T
产品简介
本产品包含经过改良的高性能热启动 Taq酶、有效抑制非特异扩增的 Buffer、SYBR Green Ⅰ荧光染料、dNTPs 等主要成分，为 2×即用型预混 Mix，使用时只需加入引物、模板、水，使其工作浓度为 1×即可进行 qPCR 反应。
本产品中已添加广型的参比染料，适配于市面上的各种 qPCR 仪，qPCR 反应液中无需额外添加参比染料来校正各个反应。
储存条件
本产品需置于-20℃中避光储存，Mix 溶解后可在 4℃稳定存放 3 个月，使用时尽可能避免反复冻融。冰袋运输。
使用方法
一、按照下方表格的参数配置反应（20 μL 体系）
试剂 使用量 终浓度 qPCR SYBR Green Fast Taq Mix 10 μL 1× 正向引物（10 μM） 0.4 μL 0.2 μM 反向引物（10 μM） 0.4 μL 0.2 μM 模板 1~2 μL 10~200 ng/20 μL Nuclease-Free Water 补至 20 μL 注：如果模板为 cDNA 原液，则模板的加入量不应超过总反应体系的 10%。
二、按照以下程序进行 qPCR 反应
两步法（推荐）
循环数 温度 时间 预变性 1 95℃ 30 sec 变性 40 95℃ 10 sec 退火/延伸（采光） 60℃ 30 sec 熔解曲线 1 仪器默认 仪器默认 三步法
循环数 温度 时间 预变性 1 95℃ 30 sec 变性 40 95℃ 10 sec 退火 55~65℃ 10 sec 延伸（采光） 72℃ 30 sec 熔解曲线 1 仪器默认 仪器默认 注：采光，即采集荧光信号。
数据分析
qPCR 实验可以对目的基因进行相对定量及绝对定量。
相对定量分析需要设定一个内参基因。 目的基因的相对表达量公式：2^-(ΔΔCt)。以下方数据为例进行模拟计算。根据仪器导出的 Ct 值，计算目的基因和内参基因的平均 Ct 值。
内参基因平均 Ct 目的基因平均 Ct 对照组 15 17 实验组 1 15 18 实验组 2 15 16 计算各组目的 Ct 与内参 Ct 差值：对照组：17-15=2 实验组 1 ：18-15=3 实验组 2 ：16-15=1
实验组 1 相对于对照组的相对表达量为：2-(3-2) =0.5 即实验组 1 的目的基因表达是对照组的 0.5 倍
实验组 2 相对于对照组的相对表达量为：2-(1-2) =2 即实验组 2 的目的基因表达是对照组的 2 倍绝对定量需要根据目的基因另外合成标准品，并制作标准曲线。
引物设计原则
1. 扩增产物的长度尽量控制在 100-300 bp。
2. 引物长度尽量控制在 17-25nt ，GC 含量尽量控制在40-60% 。A 、T、G、C 的整体分布尽量均匀。
3. 使用生信网站中的 BLAST 功能确认引物的特异性。
常见问题与解决方案
1. 空白对照 NTC 出现信号。
反应体系在超净工作台内配制，防止气溶胶污染。
循环数不宜过多，尽量不超过 40 个循环。
重新设计引物，避免出现引物二聚体。
2. 熔解曲线出现双峰或多峰。
引物特异性差，需重新设计。
适当降低引物浓度。
cDNA 模板存在基因组 DNA 污染，提取的 RNA 需使用 DNA 酶进行消化。
3. Ct 值太大。
模板浓度低，加大模板量；模板降解，重新制备模板。
扩增效率低、产物过长，重新设计引物，扩增产物的长度尽量控制在 80~220 bp。
反应体系中存在抑制剂，重新配置。
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产品组成
组分 规格（500T） 货号 Fast Taq SYBR Green qPCR Mix 5×1 mL 500-102A Nuclease-Free Water 1×5 mL 500-102B -
注意事项
1. 本产品含有荧光染料，储存时和使用过程中均需尽可能避光及反复冻融。
2. 待 Mix 完全解冻融化后方可使用，且使用过程前需上下颠倒混匀，不能涡旋或振荡混匀，避免产生过多的气泡。
3. 本产品中已添加广型的参比染料，适配于市面上的各种 qPCR 仪，qPCR 反应液中无需额外添加参比染料来校正各个反应。
关键词
信天翁
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