Fast First-Strand cDNA Synthesis Mix for RT（with dsDNase）
6合1超级mix 实验操作、计算更少
一键复制信息
- 产品描述
- 组成成分
- 注意事项
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产品简介
本产品包含具有高温耐受性的逆转录酶及其反应所需的 Buffer、RNase 抑制剂、dNTPs、Oligo(dT)20VN、随机引物等主要成分，为 5×即用型预混 Mix，使用时只需加入 dsDNase 及其反应所需的 Buffer 、RNA 模板、水， 使其工作浓度为 1×即可进行逆转录，得到的 cDNA 主要用于下游的 qPCR 实验。
本产品的逆转录酶是通过基因工程的方法将 M-MLV 基因进行特定功能改造，并通过大肠杆菌的重组表达而获得，该酶去除了 RNase H 活性，具有更高的温度耐受性，可进行高温逆转录，降低 RNA 的高级结构与非特异性因素对cDNA 合成的不利影响。
储存条件
2~8℃保存，3个月有效；-20℃保存，两年有效。使用时尽可能避免反复冻融。冰袋运输。
使用方法
一步法（适用于基因组 DNA 含量低的 RNA 样品）
于冰上配制如下反应液:
试剂 使用量 Fast First-Strand cDNA Synthesis Mix 4 μL dsDNase 1 μL RNA 模板 50 ng~1 μg Nuclease-Free Water 补至 20 μL 注：推荐使用试剂盒提取的 RNA 作为模板，信天翁生物的 RNA 提取试剂盒可适用。瞬时离心，吹打混匀后按照如下程序进行反应：
温度 时间 用途 37℃ 2 min 去除基因组 DNA 55℃ 15 min 逆转录 85℃ 5 min 终止逆转录 将得到的cDNA 置于冰上，用于后续的实验。可在-20℃中短期保存，建议不超过 1 周。长期保存请分装后放置-80℃冰箱。
两步法（适用于基因组 DNA 含量高的 RNA 样品）
1. 去除基因组 DNA
于冰上配制如下反应液:
试剂 使用量 dsDNase 1 μL 10×dsDNase Buffer 1 μL RNA 模板 50 ng~1 μg Nuclease-Free Water 补至 10 μL 注：推荐使用试剂盒提取的 RNA 作为模板，信天翁生物的 RNA 提取试剂盒可适用。瞬时离心，吹打混匀后按照如下程序进行反应：
温度 时间 用途 37℃ 2 min 去除基因组 DNA 65℃ 2 min 失活 dsDNase，终止反应 注：若 RNA 模板中基因组 DNA 的含量较多，可适当延长 37℃的孵育时间至 5 min。
2. 第一链 cDNA 合成
于冰上配制如下反应液:
试剂 使用量 “第 1 步”的反应产物 10 μL Fast First-Strand cDNA Synthesis Mix 4 μL Nuclease-Free Water 补至 20 μL 注：推荐使用试剂盒提取的 RNA 作为模板，信天翁生物的 RNA 提取试剂盒可适用。瞬时离心，吹打混匀后按照如下程序进行反应：
温度 时间 用途 50℃ 15 min 逆转录 85℃ 5 min 终止逆转录 注：若目标 RNA 不含有 Poly(A)结构，可预先进行 25℃温育 10 min，然后再按照该程序进行反应。
将得到的cDNA 置于冰上，用于后续的实验。可在-20℃中短期保存，建议不超过 1 周。长期保存请分装后放置-80℃冰箱。
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产品组成
组分 规格（100T） 货号 Fast First-Strand cDNA Synthesis Mix 400 μL 500-101A dsDNase 1×100 μL 500-101B 10×dsDNase Buffer 200 μL 500-101C Nuclease-Free Water 2×1mL 500-101D -
注意事项
1. 包含 Oligo(dT)20VN 和随机引物，不仅适用于含有 Poly(A)结构的真核生物 mRNA，也适用于不含有 Poly(A)结构的原核生物 RNA、真核生物 rRNA 和 tRNA 等模板，但不适用于 miRNA 等小 RNA 模板。
2. 待 Mix 完全解冻融化后方可使用，且使用过程前需上下颠倒混匀，不能涡旋或振荡混匀，避免产生过多的气泡。
3. RNA 的纯度和完整性都会影响 cDNA 的产量和下游的 qPCR 实验结果，因此，尽可能使用试剂盒来提取 RNA。
关键词
信天翁
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