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1分钟学会细胞复苏
发布时间:2026-05-06
细胞复苏教程
（一）细胞冻存：
1. 常规方法收集对数期的贴壁细胞或悬浮细胞于试管中（注：贴壁细胞需处理为悬浮细胞）。
2. 根据培养细胞的密度和冻存管的大小确定所需冻存细胞数。
3. 将所需数目的细胞悬浮液置于离心管中，1000rmp，5 分钟离心收集培养细胞沉淀，彻底弃去离心管中的上清液。
4. 加入适量的细胞冻存液于离心管中，使细胞浓度约为 5×105 -1×107 /ml。轻柔地混匀细胞，制成细胞混合液。
5. 将离心管中的细胞混合液分装于已标记的冻存管中，建议每管 1ml 或 1.5ml。
6. 直接将分装好的细胞冻存管放入-80℃超低温冰箱中，可长期冷冻保存。
7. 如果想液氮中长期保存，需先放入-80℃冰箱至少一天时间，方可移至液氮罐中保存（注：须使用可用于液氮冻存的细胞冻存管。）
（二）细胞复苏：
1. 自-80℃冰箱或液氮罐中取出冻存管，检查盖子是否旋紧，立即放入 37℃水浴中快速解冻（避免冰晶重新结晶而造成细胞死亡），轻摇冷冻管使其在 1~2 分钟内全部融化。
2. 待冻存管中细胞混合液完全融化后，立即加入 1ml 细胞培养基于冷冻管中与细胞混合，将其中的混合液移至含有约 5ml 该细胞培养基的离心管中，1000rmp，5 分钟离心收集冻存细胞沉淀，移去上清液（操作时小心，切勿将细胞沉淀移去）。
3. 加入预热好的完全培养基，混合均匀，转移到细胞培养皿或培养瓶中，置于细胞培养箱中培养。
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