冻存了三年以上 PBMC，如何分选出高纯度 T 细胞？中科院先进院课题组 Demo
发布时间:2026-08-27
很多课题组会使用生物样本库冻存多年的PBMC开展回溯性研究。这类液氮长期冻存样本科研价值很高，但也会遇到不少现实难题：冻存三年以上的PBMC复苏后活度下降，凋亡碎片、死细胞变多；部分样本冻存记录不全，无法确定准确冻存时长，复苏之后细胞整体收获量偏低。
中科院先进院课题组就遇到这类珍贵样本：这批PBMC冻存超过三年，冻存起始时间无法追溯；实验优先需要高纯度无标记CD3⁺T细胞用于下游分子、功能实验，可以接受细胞数量的损失。本次上门Demo实地验证FiniGet分必得®人CD3⁺T细胞阴性分选试剂盒（120‑6001），整套流程严格按照说明书操作，15分钟完成分选，流式检测CD3⁺T细胞纯度达到97.65%。
| 项目 | 详情 |
|---|---|
| 实测场景 | 中科院先进院课题组上门分选Demo |
| 实测日期 | 2026‑08‑21 |
| 分选方案 | 人CD3⁺T细胞无柱磁珠阴性分选 |
| 实验样本 | 复苏后人PBMC，冻存三年以上，冻存档案记录不全；复苏后细胞回收量偏低；分选前CD3⁺占比64.32% |
| 实测试剂盒 | FiniGet分必得®人CD3⁺T细胞阴性分选试剂盒（120‑6001） |
| 配套耗材 | FiniGet细胞分选缓冲液、FiniGet单孔磁力架 |
| 分选诉求 | 优先纯度，容忍细胞损失 |
分选前PBMC样本CD3⁺T细胞占比64.32%，分选完成之后流式检测CD3⁺T细胞纯度达到97.65%。样本本身经过超长期冻存复苏，存在细胞损耗，该表现匹配课题组优先追求纯度的实验目标。
生物样本库归档的超长期冻存PBMC复苏后容易出现淋巴细胞凋亡、细胞碎片增多。死细胞与碎片容易带来非特异性结合，给磁珠分选带来不小挑战。很多存档老样本台账不全，样本资源十分珍贵。本次现场实测可以看到这套体系对于冻存损伤样本具备不错的适配能力。
试剂盒采用生物素标记抗体Cocktail组合标记B细胞、单核细胞、NK细胞等非T靶细胞，再通过链霉亲和素磁珠去除杂细胞。收获CD3⁺T细胞不带磁珠、无抗体结合，不会造成T细胞预激活，分选产物可直接用于体外刺激、细胞因子检测、转录组、单细胞测序等各类下游实验。
无需分选柱，依靠配套磁力架完成分离，规避分选柱基质对复苏脆弱细胞带来的机械剪切损伤；可根据磁力架型号选择倾倒收集或者枪头吸取上清两种收集模式，适配珍贵、细胞收获量有限的样本。
冻存复苏PBMC可直接开展分选，样本前处理不需要裂红，全程无需避光；分选缓冲液添加胎牛血清无需灭活；整套流程耗时仅15分钟；Mouse FcR Blocker为可选组分，冻存样本碎片较多场景建议添加，降低非特异性结合。
针对“优先纯度，接受细胞损失”这类实验需求，该体系具备不错的适配效果。本次冻存三年以上PBMC样本，原始CD3占比64.32%，分选纯度可达97.65%，保障下游实验数据稳定。
A：长期冻存PBMC复苏，本身就会出现细胞死亡、总细胞量下降，属于样本本身固有属性。如果实验设计优先要求纯度，可以选用阴性分选方案；本案例中起始1×10⁷ PBMC，分选得到1×10⁶细胞，纯度97.65%。如果样本珍贵、实验允许接受回收率下降，该套体系可以实现高纯度输出；但分选结果依旧受PBMC复苏活率、碎片多少、人为操作影响，存在个体波动。
A：FiniGet分必得®人源系列试剂盒：阴性分选得到完全无标记“原生”T细胞；阳性分选依靠磁珠直接捕获目标T细胞。科研人员结合实验是否需要无标记细胞、样本冻存状态、对回收率 / 纯度的优先级灵活选择。
A：整套分选操作不需要避光；复苏PBMC样本不需要额外裂红；分选缓冲液中添加胎牛血清无需灭活。针对冻存样本死细胞碎片多的特点，建议添加Mouse FcR Blocker，降低非特异性吸附，进一步保障纯度。
A：PBMC复苏操作尽量温和，减少离心带来的进一步细胞损伤；样本尽量过筛去除细胞团块；若细胞团聚严重，可以使用DNase I处理消解DNA碎片；分选前优先做流式基线检测，明确原始CD3占比，对分选结果做预判；链霉亲和素磁珠使用前必须充分涡旋震荡30 s，混匀后不要高速离心；磁力架孵育时间严格按照说明书，吸取上清收集目标细胞的时候，枪头不要触碰管壁吸附的磁珠‑杂细胞复合物，防止杂细胞污染拉低纯度。
A：建议使用配套型号磁力架；反应体系体积不能超过磁极适用上限，保障杂细胞捕获效率。单孔磁力架适合倾倒法收集上清；八联排磁力架建议枪头吸取上清；无论哪种方式，操作过程试管不能离开磁力架。
FiniGet分必得®千人细胞分选上门行动面向全国高校、科研院所、医院科研平台开放预约。技术人员上门完成标准化分选演示，现场输出流式纯度检测数据；针对冻存多年PBMC复苏碎片多、活率差、追求纯度接受细胞损失、珍贵生物库样本分选等高频痛点提供实操解决方案。经常处理人PBMC、开展人T细胞分选的实验室，可预约CD3阴性分选试剂盒搭配分选缓冲液成套方案优化实验流程。更多Demo实测案例与试剂盒详情，可查阅FiniGet分必得细胞分选产品全集。
咨询热线：400-090-1923
品牌：FiniGet分必得｜细胞磁珠分选解决方案
出品：信天翁生物科技（广州）有限公司
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