高龄偏大脾脏样本 ,如何开展阴性分选?广州医科大学课题组demo
FiniGet 分必得 ® 小鼠 naive CD4⁺T 细胞阴性分选试剂盒,C57 高龄偏大脾脏样本分选实测,原始 naive CD4⁺T 本底仅 6.8%、红细胞占比达 33%,无柱阴性分选,细胞沉淀无红细胞、无磁珠残留,分选纯度 91.74%,分选细胞可直接用于下游功能检测。
做小鼠 Th2 分化研究的科研人员经常需要分选 naive CD4⁺T 细胞,高龄 C57 小鼠脾脏常出现肿大,伴随红细胞占比33%。大多数老师选择裂红处理,损伤脆弱的 naive T 细胞,造成活率下降,靶细胞得率偏低,严重干扰后续 Th2 体外诱导分化实验。

本次 FiniGet 分必得 ® 技术团队前往广州医科大学越秀校区,现场上门 Demo 实操,解决客户反馈的分选收获细胞数量不足问题。样本为周龄未知的高龄 C57 小鼠新鲜肿大脾脏单细胞悬液,整套为无柱阴性磁珠分选,无需分选柱,可兼容红细胞背景脾脏样本,分选获取 untouched 无标记 naive CD4⁺T 细胞,直接用于下游 Th2 诱导分化功能实验。
整套分选流程严格遵循试剂盒官方标准操作方案,全程快至 15 分钟完成细胞分离,无需裂红处理、无需避光操作,适配动物实验室常规脾脏样本前处理。

实测场景:广州医科大学越秀校区科研客户线下分选 Demo
分选方案:小鼠 naive CD4+ T 细胞阴性磁珠分选(无柱式)
实验样本:C57 小鼠新鲜脾脏单细胞悬液,高龄小鼠脾脏体积偏大,原始样本红细胞占比 33%,naive CD4+T 细胞本底占比 6.8%
实测试剂盒:FiniGet 分必得 ® 小鼠 naive CD4+ T 细胞分选试剂盒
生产厂商:信天翁生物科技(广州)有限公司
配套耗材:GOONIE 140‑2001 细胞分选缓冲液、GOONIE 140‑2000 磁力架

本次起始细胞总量 1×10⁷,分选前细胞活性 85%,严格按照试剂盒标准流程开展阴性分选,分选完成后流式检测纯度与细胞活率:
分选前总细胞:1×10⁷
分选前样本活性:85%
原始样本红细胞占比:33%
分选前 naive CD4+T 细胞本底占比:6.8%(低丰度靶细胞样本)
分选后细胞活性:90%
分选后沉淀状态:无红细胞污染、无磁珠残留
分选后 naive CD4+T 细胞流式纯度:91.74%
高龄 C57 小鼠脾脏肿大,样本红细胞背景占比33%,naive CD4+ T 细胞本底占比低,杂细胞基数大,容易出现杂细胞去除不完全、靶细胞得率低、红细胞残留干扰下游分化实验等问题。本次上门 Demo 实测验证 FiniGet 分必得 ®naive CD4+T 阴性分选体系在低丰度靶细胞、偏大脾脏样本上的纯化能力:
阴性分选依靠生物素标记抗体组合去除 B 细胞、髓系细胞、记忆 T 细胞等各类非目标杂细胞,naive CD4+T 细胞全程无磁珠、无抗体标记,充分保留细胞静息原始状态,分选后细胞无异常激活,可直接开展 Th2 诱导分化及后续功能实验;
无分选柱依赖,搭配常规 GOONIE 磁力架即可完成全套操作;
本次样本红细胞占比达 33%,分选结束沉淀无红细胞、无磁珠残留,细胞活率由分选前 85% 提升至 90%,死细胞、红细胞随杂细胞一并被磁珠体系去除;
针对前期客户反馈分选收获数量偏低的情况,现场同步梳理样本制备、孵育时间、收集操作等关键控制点,给出实操优化建议,兼顾纯度与细胞回收。
经本试剂盒分离得到的 naive CD4+T 细胞,适配 Th1/Th2/Th17 等 T 细胞亚群诱导分化、细胞功能检测、免疫衰老、体内过继转移、转录组与单细胞测序等小鼠免疫方向研究。
A1:可以。本次广医越秀 Demo 实测,原始 naive CD4⁺T 占比 6.8%,红细胞占比 33%,分选后纯度可达 91.74%,沉淀无红细胞、磁珠残留。高龄脾脏样本不建议强裂红处理,容易造成 naive CD4+ T 细胞损伤死亡,试剂盒体系可清除大部分红细胞与杂细胞。
A2:naive CD4⁺T 本身属于脾脏低丰度亚群;肿大脾脏研磨产生细胞团块会裹挟目的细胞;Cocktail、磁珠孵育时间不标准;磁力静置时间不足;收集操作不当,均会造成得率下降。上门 Demo 可以现场排查样本前处理和全套操作流程,给出针对性优化方案。
A3:可以。本方案为阴性 untouched 分选,naive CD4⁺T 细胞全程无标记,细胞表型完整,分选后活率 90%,可直接铺板开展 Th2 体外极化诱导和后续功能检测。
A4:建议配套 GOONIE 140‑2000 磁力架使用,磁极作用范围匹配试剂盒操作体积,充分截留携带磁珠的红细胞与杂细胞,降低杂细胞残留风险,保障分选纯度。
全国高校、科研院所均可预约 FiniGet 分必得 ® 上门磁珠分选实操服务:
现场完整演示高龄肿大脾脏样本naive CD4+T 细胞占比 6.8% 伴红细胞占比33%背景分选整套流程,定位分选得率低的各类诱因;
手把手规范 Cocktail 配比、磁珠混匀、孵育时长、磁力静置、样本制备等关键操作,稳定提升分选纯度与细胞回收;
线下免费实体 Demo,出具流式纯度数据,直观验证 FiniGet 分必得 ® 磁珠分选产品效果;
支持申领 FiniGet 分必得 ® 细胞阴性分选试剂盒小样,实验室自主复刻标准化小鼠 naive CD4⁺T 细胞分选实验。
如果你长期处理老年小鼠脾脏样本,受困于 naive T 细胞丰度低、红细胞干扰、分选得率不足,下游要做 T 细胞体外诱导分化实验,可预约上门磁珠分选实操、申领试剂盒小样。依托 FiniGet 分必得 ® 阴性磁珠分选体系,稳定收获高活性、高纯度 naive CD4⁺T 细胞。更多 Demo 实测案例与试剂盒详情,详见 FiniGet分必得-信天翁生物。
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