PE anti-mouse FOXP3 Antibody（FJK-16s）
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NeoMab · 12-27004-1 · PE Rat Anti-mouse FOXP3 Antibody (FJK-16s)
一、产品简介TL;DR：PE 标记的大鼠抗小鼠 FOXP3 单克隆抗体，克隆号 FJK-16s，适用于流式细胞术检测调节性 T 细胞（Treg）。FOXP3 是 Treg 特异性转录因子，胞内抗原，需固定破膜后染色。激发/发射 565/574 nm，建议用量 ≤ 0.5 µg/10⁶ cells，浓度 0.2 mg/mL，2–8℃ 避光保存。
二、核心参数参数 规格 货号 12-27004-12（25 µg）/ 12-27004-15（100 µg） 克隆号 FJK-16s 反应性 Mouse 宿主 Rat 亚型 Rat IgG2a, κ 抗体类型 单克隆抗体 荧光标记 PE（藻红蛋白） 激发/发射 565/574 nm 浓度 0.2 mg/mL 建议用量 ≤ 0.5 µg / 10⁶ cells（100 µL 体系） 适用仪器通道 BL2-A / PE-A（488 nm 或 532/561 nm 激光） 应用 Flow Cyt（流式细胞术） 检测靶点 FOXP3（胞内转录因子） 储存 2–8℃，避光，不可冷冻，冰袋运输，有效期两年 三、靶点背景FOXP3（Forkhead Box P3）也称 SCURFIN 或 JM2，是一种 49–55 kD 的转录因子，属于 forkhead/winged-helix 家族。FOXP3 是调节性 T 细胞（Treg）的特异性标志物，在 CD4⁺CD25⁺ Treg 细胞中高表达，是 Treg 发育和功能的关键调控因子。
Gene ID：54352 | 其他名称：FORKHEAD BOX P3、SCURFIN、JM2
为什么 FOXP3 重要？
FOXP3 突变会导致"scurfy"小鼠表型——一种致命的自身免疫性疾病。在人类中，FOXP3 突变引起 IPEX 综合征（免疫失调、多内分泌腺病、肠病、X 连锁综合征）。FOXP3⁺ Treg 细胞通过抑制效应 T 细胞活性，维持免疫耐受，在自身免疫病、肿瘤免疫、移植耐受、过敏等研究中是核心检测指标。
四、流式染色流程⚠ FOXP3 是胞内转录因子，必须经过固定破膜处理才能染色。以下流程包含表面染色 + 胞内 FOXP3 染色两步。
所需材料
- FOXP3/转录因子流式固定破膜缓冲液试剂盒（含 4X 固定/破膜浓缩液 + 10X 破膜缓冲液）
- 流式细胞染色缓冲液
- 表面标记抗体（如 CD4、CD25 等，可选）
- FOXP3 荧光流式抗体（本品）
- Fc 受体封闭剂（可选）
步骤 1–2：细胞准备与死活染料（可选）
收集细胞并用 1X PBS 洗涤 1–2 次，每次 350–500×g 离心 5 分钟，弃上清。（可选）在固定步骤之前，使用死活细胞鉴定染料标记活细胞。
步骤 3：细胞表面染色（可选）
（可选）使用推荐用量的流式抗体进行细胞表面染色（如 CD4 FITC、CD25 APC 等），染色结束后用 1 mL 染色缓冲液洗涤细胞，350–500×g 离心 5 分钟，弃上清。
步骤 4：固定与破膜
洗涤后的细胞，按每管 1×10⁶ 个细胞收集至 EP 管（流式管）中。加入 1 mL 1X FOXP3/转录因子固定/破膜液，缓慢吹打重悬细胞，室温避光孵育 30–60 分钟。
步骤 5：洗涤
室温 350–500×g 离心 5 分钟，弃上清。每管加入 1–2 mL 1X 流式细胞术破膜缓冲液，缓慢吹打重悬细胞，350–500×g 离心 5 分钟，弃上清。
步骤 6：封闭非特异结合
加入 100 µL 1X 流式细胞术破膜缓冲液重悬细胞，静置 10–15 分钟。
步骤 7–8：FOXP3 胞内染色
加入 PE Rat Anti-mouse FOXP3 Antibody（FJK-16s）（建议 ≤ 0.5 µg/10⁶ cells），4°C 避光孵育 30–45 分钟，用于检测细胞内抗原。用 1–2 mL 1X 流式细胞术破膜缓冲液洗涤细胞，350–500×g 离心 5 分钟，弃上清。重复该步骤。
步骤 9：重悬上机
加入 200–300 µL 1X 流式细胞术破膜缓冲液重悬细胞，流式细胞仪检测。
五、对照设置参考对照类型 用途 空白对照 用于调节电压 单染/单阳性对照 用于调节补偿 同型对照 消除背景染色干扰 FMO（荧光扣除）对照 确定设门的准确性 六、注意事项1. 使用前快速离心抗体管，回收管壁上的抗体。
2. 流式抗体使用浓度建议针对不同样本做滴定实验，确定最适浓度。
3. 巨噬细胞、单核细胞、粒细胞、B 细胞、树突状细胞等表达 Fc 受体，会与抗体 Fc 段结合影响结果。推荐使用 Fc 受体封闭剂，每管加入 5 μL，室温孵育 5–10 min，不用洗涤。
4. 本产品仅用于科研，请勿用于体外诊断。
⚠ FOXP3 胞内染色关键提示：
• 必须使用 FOXP3/转录因子专用固定破膜试剂盒，普通表面染色破膜液不适用
• 固定破膜液使用前需用稀释液配成 1X 工作液，破膜缓冲液需用超纯水稀释至 1X
• FOXP3 染色在 4°C 进行（非室温），孵育时间 30–45 min
• 洗涤步骤需重复一次，确保去除未结合抗体
• PE 荧光激发峰 565 nm，避免与 APC/AF647 通道重叠，需设置补偿七、常见问题 FAQQ：FJK-16s 克隆号适用于哪些小鼠品系？A：FJK-16s 适用于 C57BL/6、BALB/c 等常见小鼠品系，识别小鼠 FOXP3 转录因子。
Q：FOXP3 是胞内抗原，表面染色抗体能一起用吗？A：可以。推荐先做表面染色（如 CD4 FITC、CD25 APC），洗涤后再固定破膜，最后加 FOXP3 PE 做胞内染色。注意选择荧光通道不冲突的抗体组合。
Q：固定破膜液可以用普通的吗？A：不建议。FOXP3 是转录因子，需要 FOXP3/转录因子专用固定破膜试剂盒。普通表面染色破膜液可能无法有效暴露 FOXP3 抗原表位，导致信号弱或假阴性。
Q：FOXP3 染色为什么在 4°C 而不是室温？A：4°C 孵育可减少非特异结合，提高信噪比。FOXP3 在 Treg 中表达量相对较低，低温孵育有助于抗体特异性结合。
Q：FJK-16s 可以检测人 FOXP3 吗？A：本品反应性为 Mouse，不建议用于人样本。人 FOXP3 检测请选择反应性为 Human 的抗体。
Q：Treg 分型需要哪些抗体？A：经典 Treg 表型是 CD4⁺CD25⁺FOXP3⁺。推荐 panel：CD4（表面）+ CD25（表面）+ FOXP3（胞内）。注意 CD25 是 IL-2Rα，激活 T 细胞也会高表达，需结合 FOXP3 区分 Treg 与活化效应 T 细胞。
咨询热线：400-090-1923
品牌：NeoMab · 重组抗体专家
出品：信天翁生物科技（广州）有限公司
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产品组成：
货号/规格 组分名称 体积 12-27004-12 25T PE anti-mouse FOXP3 Antibody（FJK-16s） 125 μL 12-27004-15 100T PE anti-mouse FOXP3 Antibody（FJK-16s） 500 μL 保存：2-8℃避光保存。冰袋运输。
关键词
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