如何减少存放时间较长血液样本中的粒细胞与血小板污染

发布时间:2026-06-29

在免疫学研究和细胞治疗相关实验中，从血液样本中获取高纯度的目标细胞是实验成功的基石。当血液样本无法立即处理，存放时间超过24小时后，一个常见的问题就会出现：粒细胞的密度会发生改变，导致后续通过密度梯度离心法分离外周血单个核细胞时，难以将粒细胞彻底去除。此外，血小板污染也是PBMC分离中一个令人头疼的问题。本文将介绍一套基于密度梯度离心的解决方案，帮助科研人员有效应对这些挑战。

核心技术原理

本文推荐的方法在传统密度梯度离心基础上引入了FiniGet分必得®CentriSep™人粒细胞去除试剂盒（120-7003），试剂盒里的组分可以特异性的将粒细胞随红细胞一起快速沉降到离心管底部。在离心力作用下，被抗体标记的粒细胞和红细胞因密度大而沉降穿过梯度液层到达管底，而目标单个核细胞则因其固有密度保留在血浆与梯度液之间的界面层。通过这一策略，仅需一次密度梯度离心即可将样本中的粒细胞比例控制在极低水平，远优于单独使用密度梯度离心。

FiniGet分必得®CentriSep™人粒细胞去除试剂盒（120-7003）流程示意图

实验操作流程（使用普通离心管）

在进行实验前，请确保所有试剂和样本均已恢复至室温（15-25℃），这一细节对分离效果至关重要。

向每毫升全血中加入50 μL FiniGet分必得®CentriSep™人粒细胞去除试剂盒的试剂（120-7003），轻轻混匀后，在室温下孵育20-30分钟。
加入等体积的含2%胎牛血清的磷酸盐缓冲液（PBS + 2% FBS）稀释血液样本，并充分混合。
小心地将稀释后的血样叠加到密度梯度离心液的液面上，注意避免两种液体混合，以保持清晰的界面。
在室温下，以1200 × g的离心力离心20分钟。特别注意：离心机的刹车必须设置为“关闭”，这是为了防止突然的减速扰动已形成的密度梯度分层，确保分离效果。
离心后，样本管中将形成清晰的界面层。使用移液管小心地吸取位于密度梯度离心液与上层血浆之间的白膜层（富含单个核细胞）。
收集到的细胞用PBS + 2% FBS洗涤，重复洗涤两次，以去除残留的密度梯度液和血小板。

实验操作流程（使用SepAid™管）

25ml 规格 SepAid PBMC离心管

50ml 规格 SepAid PBMC离心管

若希望操作更便捷、细胞回收更稳定，可选用SepAid™专用管配合操作，其内置的插件能简化加样步骤。

向每毫升全血中加入50 μL FiniGet分必得®CentriSep 人粒细胞去除试剂盒的试剂120-7003），室温下孵育10分钟。
加入等体积的PBS + 2% FBS稀释血液，并混合均匀。
将密度梯度离心液通过SepAid™管中心的孔加入，使其流至插件下方。
将稀释后的血样沿SepAid™管壁缓缓加入。
室温下，以1200 × g离心10分钟。与普通离心管操作不同，此时可以开启离心机刹车，因为SepAid™管的设计能有效保护梯度界面不受扰动。
离心后，将SepAid™管中的上层液体（富含单个核细胞）迅速倾倒至一个新的无菌离心管中。注意倾倒动作要果断，勿将管子倒置超过2秒，以防底部的红细胞和粒细胞等污染物混入。
用PBS + 2% FBS洗涤收集到的细胞，重复两次。

进一步减少血小板污染

血小板是密度极小的细胞成分，在密度梯度离心后，它们通常会悬浮在上层血浆中。为了进一步降低血小板污染，可以在收集单个核细胞层之前，先小心吸弃上层三分之一的血浆。或者，在完成上述洗涤步骤后，增加一次低速离心（如120 × g，室温离心10分钟，关闭刹车），这一步骤可使血小板保留在上清液中，从而实现有效去除。