FITC Mouse Anti-human CD3 Antibody（OKT3）
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TL;DR：NeoMab 11-1003-1 FITC 标记小鼠抗人 CD3 单克隆抗体（OKT3 克隆），特异性识别人 CD3ε 链，标记外周血所有成熟 T 细胞及 60-85% 胸腺细胞；抗体浓度 100 µg/mL，推荐用量 5 µL/百万细胞；蓝光（488 nm）激发，发射波长 526 nm；适用于流式细胞术（Flow Cytometry）检测人 T 细胞；2-8℃ 避光保存，两年有效。
应用领域：T 细胞免疫表型分析、T 细胞亚群鉴定（联合 CD4/CD8）、多色流式 Panel 设计、免疫监测、肿瘤免疫研究、感染免疫研究、移植免疫研究、T 细胞增殖与活化研究。
一、产品规格总表
参数 详情 产品名称 FITC Mouse Anti-human CD3 Antibody (OKT3) 货号 11-1003-12（25 Tests）/ 11-1003-15（100 Tests） 克隆号 OKT3 宿主 / 亚型 Mouse IgG2a, κ 偶联物 FITC（异硫氰酸荧光素） 种属反应性 Human（人） 验证应用 Flow Cytometry（流式细胞术） 激发 / 发射波长 498 nm / 526 nm 激发激光器 Blue Laser（488 nm） 抗体浓度 100 µg/mL 推荐用量 5 µL / 百万细胞（100 µL 染色体积）或 5 µL / 100 µL 全血 保存条件 2-8℃ 避光保存，两年有效；冰袋运输，请勿冷冻 产品形态 液体，PBS 缓冲液 规格 11-1003-12：125 µL（25T）/ 11-1003-15：500 µL（100T）
二、靶标背景 · CD3ε
CD3ε（CD3 epsilon chain）是人 CD3/T 细胞抗原受体（TCR）复合物的关键信号转导亚基，分子量约 20 kDa，属于免疫球蛋白超家族（IgSF）成员。CD3 复合物由 ε、γ、δ、ζ 四条跨膜蛋白组成异源多聚体，与 TCRαβ 或 TCRγδ 异源二聚体共同构成 T 细胞表面的 CD3/TCR 复合物，负责抗原识别与信号转导。
CD3ε 是一种非糖基化 I 型跨膜蛋白，胞外段含有一个 Ig 样结构域（ECD），胞内段含有一个免疫受体酪氨酸活化基序（ITAM）。TCR 识别抗原后，ITAM 被 Lck 磷酸化，启动下游 ZAP-70 → LAT → PLCγ1 信号级联，是 T 细胞激活的分子基础。
表达分布：外周血 70-80% 淋巴细胞（主要为成熟 T 细胞和 NK T 细胞）；胸腺中 60-85% 胸腺细胞；所有外周成熟 T 细胞均表达 CD3。
别名：T3、T3E、TCRE
Gene ID：916
SwissProt：P09693（CD3E）
分布：成熟 T 细胞（αβ 和 γδ）、NK T 细胞、胸腺细胞分化各阶段
三、克隆号信息 · OKT3
OKT3 是抗人 CD3 最具历史意义的单克隆抗体克隆号之一，由 Ortho Diagnostics（现属 Janssen/Johnson & Johnson）于 1980 年代初开发，与 OKT4（抗 CD4）同属 OKT 系列。OKT3 特异性识别 CD3ε 链上的表位，标记几乎所有表达 CD3/TCR 复合物的 T 细胞。
免疫学特性：OKT3 是 IgG2a 亚型，其 Fc 段具有较强的补体固定能力和 Fc 受体结合活性。文献报道 OKT3 可固定补体（fix complement）、刺激 T 细胞增殖和细胞因子产生，并能阻断其他 CD3ε 特异性抗体（包括 UCHT1 和 SK7）与 CD3 的结合。这些特性使 OKT3 在免疫功能研究中具有独特价值——当实验目的不仅是"检测"T 细胞，还需要研究 CD3 介导的活化信号时，OKT3 是更合适的选择。
与 UCHT1 克隆的比较：
比较项 OKT3 UCHT1 宿主亚型 IgG2a, κ IgG1, κ Fc 活性 较强（补体固定、FcR 结合） 较弱 T 细胞活化 可刺激增殖和细胞因子产生 Non-capping，活化效应弱 阻断其他 CD3 抗体 可阻断 UCHT1/SK7 结合 不阻断 OKT3 非特异背景 IgG2a Fc 可能增加背景 背景更低 适用场景 CD3 介导活化研究、补体功能实验 常规免疫表型分析、多色 Panel 典型应用：T 细胞总量鉴定、T 细胞亚群分析中与 CD4/CD8 联合使用、免疫监测 Panel 中的 T 细胞门控标记、CD3 介导的 T 细胞活化信号研究、CAR-T 细胞表型分析中的 T 细胞确认。
四、荧光素信息 · FITC
FITC（Fluorescein Isothiocyanate，异硫氰酸荧光素）是流式细胞术中经典的绿色荧光染料，激发峰 498 nm、发射峰 526 nm，由 488 nm 蓝光激光器激发。
参数 数值 激发波长 498 nm 发射波长 526 nm（绿色） 激光器 Blue Laser（488 nm） 检测通道 FITC-A / FL1（530/30 nm 滤光片） Stokes 位移 ~28 nm 分子量 389.4 Da
多色 Panel 搭配建议：FITC 发射光谱较宽（526 nm），与 PE（578 nm）存在光谱溢出，需做荧光补偿。CD3 检测常见搭配：
• FITC-CD3 + PE-CD4 + PerCP-Cy5.5-CD8 → 经典 T 细胞亚群三标
• FITC-CD3 + PE-CD4 + APC-CD8 → 三激光方案，光谱分离更好
• FITC-CD3 + PE-CD34 → T 细胞 + 造血干/祖细胞联合分析
• FITC-CD3 + PE-CD4 + APC-CD8 + PerCP-Cy5.5-CD45 → 四色 T 细胞 Panel
• FITC-CD3 + PE-CD8 + PerCP-CD4 → 经济型 T 细胞亚群方案
注意事项：FITC 的荧光强度受 pH 影响（pH < 6.5 时荧光显著减弱），确保染色缓冲液 pH 在 7.0-7.4 范围内。FITC 对光敏感，操作过程中注意避光。
五、流式染色 Protocol
所需试剂：
• NF0003 细胞染色缓冲液（PBS + 0.5% BSA + 2 mM EDTA）
• NF0004-5 7-AAD 溶液（死细胞排除，选做）
• Fc 受体封闭试剂（含单核/巨噬/B/NK 细胞样本推荐添加）
• 红细胞裂解液（全血样本需使用）
• Ficoll 分离液（PBMC 制备用）
方案 A · PBMC / 培养细胞：
Step 1 · 制备单细胞悬液
PBMC 制备请按 Ficoll 产品说明书操作。用细胞染色缓冲液洗涤细胞一次（300×g 离心 3-5 分钟），重悬细胞至终浓度 5-10×10⁶ cells/mL。分装 100 µL/tube（0.5-1×10⁶ cells/tube）至 2 mL EP 管。
Step 2 · Fc 受体封闭
巨噬细胞、单核细胞、B 细胞等表达 Fc 受体，会与抗体 Fc 段非特异性结合。推荐加入 Fc 受体封闭剂，每管 5 µL，室温孵育 5-10 min，不用洗涤。
Step 3 · 抗体染色
每管加入 5 µL FITC Anti-human CD3 (OKT3) 抗体，轻柔混匀，4℃ 避光孵育 20 分钟。
Step 4 · 洗涤
用 0.5-1 mL 染色缓冲液洗涤一次。小心吸去上清，轻拍 EP 管松动细胞沉淀。
Step 5 · 重悬
用 0.5 mL 染色缓冲液重悬细胞沉淀。
Step 6 · 死细胞排除（选做）
加入 5 µL（0.25 µg）7-AAD，冰上避光孵育 5-10 min。
Step 7 · 上机检测
流式细胞仪检测。FITC 通道选择 FL1（530/30 nm）。如不能及时测试，4℃ 避光保存，4 小时内完成检测。目标细胞建议慢速采集 10,000 个进行分析。
方案 B · 全血样本：
Step 1 · 抗体染色
取 100 µL 新鲜全血于 2 mL EP 管，加入 5 µL 抗体，吹打混匀，室温避光染色 15 分钟。
Step 2 · 裂红
加入 1 mL 1× 红细胞裂解液，吹打混匀，室温反应 5-10 分钟。
Step 3 · 离心去上清
300×g 离心 4-5 分钟，去上清。
Step 4 · 洗涤
加入 1 mL 染色缓冲液，洗涤一次。
Step 5 · 上机
用 0.5 mL 染色缓冲液重悬细胞，上机检测。
六、对照设置指南
对照类型 用途与说明 空白对照（未染色） 评估细胞自发荧光，用于调节 PMT 电压 单染/单阳性对照 多色 Panel 中用于调节荧光补偿，每种荧光素各设一管 同型对照 FITC 标记的 Mouse IgG2a, κ 同型抗体，消除非特异性背景染色。推荐货号：见 NeoMab 同型对照产品线 FMO 对照 多色 Panel 中去除某一种荧光素，用于准确设门
提示：CD3 阳性与阴性 T 细胞分群通常非常明显，在单色或简单 Panel 中可不设置同型对照。但在多色 Panel 中，建议使用同型对照或 FMO 对照确认设门边界。
七、质量数据与参考文献
每批产品均经过严格质控，包括但不限于：SDS-PAGE 纯度检测、流式细胞术功能验证（人外周血单个核细胞染色）、内毒素检测（< 0.25 EU/µg）、无菌检测。批间一致性保证实验可重复性。
参考文献：
1. Van de Griend RJ, et al. J Immunol. 1981;127(5):2027-2033.（OKT3 克隆 T 细胞活化早期信号）
2. Chatenoud L, et al. Transplant Proc. 1983;15(3):2711-2716.（OKT3 在移植排斥中的应用）
3. Abramowicz D, et al. Kidney Int. 1992;42(4):976-982.（OKT3 固定补体和诱导细胞因子释放）
4. Smith KA. Science. 1984;224(4651):889-895.（CD3 复合物信号转导机制）
5. Clevers HC, et al. Cell. 1988;54(3):301-303.（CD3ε ITAM 基序鉴定）
八、相关产品
同靶标 · 不同荧光素（OKT3 克隆）：
• 10-1003-1 Biotin Mouse Anti-human CD3 (OKT3) → 搭配链霉亲和素-荧光偶联物，灵活选择检测通道
• 12-1003-1 PE Mouse Anti-human CD3 (OKT3) → PE 红色荧光，亮度更高，适合低表达靶标
• 16-1003-1 APC Mouse Anti-human CD3 (OKT3) → APC 远红光，光谱溢出最小，多色 Panel 首选
• 26-1003-1 AF647 Mouse Anti-human CD3 (OKT3) → Alexa Fluor 647，光稳定性优于 APC
同荧光素 · 不同克隆：
• 11-1003-2 FITC Mouse Anti-human CD3 (UCHT1) → IgG1,κ 亚型，Non-capping 克隆，常规表型分析首选
T 细胞 Panel 搭配：
• 11-1004-1 FITC Mouse Anti-human CD4 (OKT4) → 与本产品联合做 CD4/CD8 比值
• 11-1008A-1 FITC Mouse Anti-human CD8 → CD3 门控后 CD8+ T 细胞鉴定
配套试剂：
• NF0003 细胞染色缓冲液（PBS + 0.5% BSA + 2 mM EDTA）
• NF0004-5 7-AAD 溶液（死细胞排除）
九、常见问题 FAQ
Q1：11-1003-1（OKT3）和 11-1003-2（UCHT1）都是 FITC Anti-CD3，怎么选？
看实验目的。如果只做常规 T 细胞免疫表型分析（鉴定 T 细胞总量、CD4/CD8 比值），UCHT1（11-1003-2）更优——IgG1 亚型背景更低、Non-capping 不干扰后续功能实验。如果需要研究 CD3 介导的 T 细胞活化信号（增殖、细胞因子释放、补体固定），或者实验体系中已知 UCHT1 与下游检测抗体存在干扰，选 OKT3（本产品）。
Q2：OKT3 的 IgG2a 亚型对实验有什么影响？
IgG2a 的 Fc 段比 IgG1 更强地结合 Fc 受体（FcγR），在表达 FcR 的细胞（单核细胞、巨噬细胞、B 细胞、NK 细胞等）上可能产生更高的非特异性背景。建议含这些细胞的样本加 Fc 受体封闭剂。但也正因 IgG2a 的 Fc 活性，OKT3 在需要 Fc 介导功能（如 ADCC、补体固定）的实验中具有优势。
Q3：说明书提到"CD3 阳性与阴性细胞分群明显，可不设同型对照"，真的不需要吗？
单色或简单 Panel（如 CD3-only 或 CD3+CD4 双标）中，CD3 表达呈典型的 bimodal 分布（明显阳性 vs 明显阴性），可以不用同型对照。但在四色以上复杂 Panel 中，即使 CD3 分群清楚，仍建议用 FMO 对照确认各亚群设门边界，避免荧光溢出导致的误判。
Q4：同型对照应该用什么？
FITC Mouse IgG2a, κ 同型抗体（注意不是 IgG1,κ——UCHT1 才用 IgG1 同型）。选择同型对照必须匹配宿主种属和亚型，OKT3 是 Mouse IgG2a,κ，所以同型对照也必须是 IgG2a,κ。
Q5：OKT3 会阻断 UCHT1 的结合？
是的。文献报道 OKT3 可以阻断 UCHT1 和 SK7 等 CD3ε 特异性抗体与 CD3 的结合，因为它们识别的表位存在空间重叠或构象影响。如果实验中需要先用 OKT3 处理细胞（如活化实验），后续再用 FITC-UCHT1 染 CD3，可能染色效率下降。建议先做抗体染色，再考虑功能处理。
Q6：可以用全血直接染色吗？
可以。本产品说明书提供了全血染色方案：100 µL 全血 + 5 µL 抗体，室温避光 15 min → 1× 裂红液裂红 5-10 min → 洗涤 → 上机。注意全血中需加 Fc 封闭剂减少有核红细胞和单核细胞非特异染色。
十、技术支持
如有实验设计、抗体选择、Panel 搭配或技术问题，欢迎联系：
📧 service@gooniebio.com
📞 400-090-1923
🏢 信天翁生物科技（广州）有限公司
📍 广州市黄埔区瑞和路 39 号纳金科技园
页面总结：11-1003-1 是 NeoMab 系列中 OKT3 克隆的 FITC 标记抗人 CD3 单克隆抗体（IgG2a,κ），与 11-1003-2 的 UCHT1 克隆（IgG1,κ）互补——前者侧重 CD3 介导活化研究，后者侧重常规表型分析。两款覆盖流式 CD3 检测的两大核心应用场景。配合 120-6001/120-6002/120-6003 等 FiniGet 细胞分选试剂盒，可从检测→分选→功能验证形成完整 T 细胞研究工作流。
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产品组成：
货号/规格 组分名称 体积 11-1003-12 25T FITC Mouse Anti-human CD3 Antibody（OKT3） 125 μL 11-1003-15 100T FITC Mouse Anti-human CD3 Antibody（OKT3） 500 μL 保存：2-8℃避光保存。冰袋运输。
关键词
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