FITC Mouse Anti-human CD3 Antibody（UCHT1）
应用：
FC
种属反应性：
Human
宿主种属：
Mouse
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- 产品描述
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- 注意事项
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TL;DR：NeoMab 11-1003-2 FITC 标记小鼠抗人 CD3 单克隆抗体（UCHT1 克隆），特异性识别人 CD3ε 链；抗体浓度 100 µg/mL，推荐用量 5 µL/百万细胞；蓝光（488 nm）激发，发射波长 526 nm；适用于流式细胞术（Flow Cytometry）检测人 T 细胞；2-8℃ 避光保存，两年有效。
应用领域：T 细胞免疫表型分析、T 细胞亚群鉴定、多色流式 Panel 设计、免疫监测、自身免疫病研究、肿瘤免疫研究、感染免疫研究、移植免疫研究。
一、产品规格总表
参数 详情 产品名称 FITC Mouse Anti-human CD3 Antibody (UCHT1) 货号 11-1003-22（25 Tests）/ 11-1003-25（100 Tests） 克隆号 UCHT1 宿主 / 亚型 Mouse IgG1, κ 偶联物 FITC（异硫氰酸荧光素） 种属反应性 Human（人） 验证应用 Flow Cytometry（流式细胞术） 激发 / 发射波长 498 nm / 526 nm 激发激光器 Blue Laser（488 nm） 抗体浓度 100 µg/mL 推荐用量 5 µL / 百万细胞（100 µL 染色体积）或 5 µL / 100 µL 全血 保存条件 2-8℃ 避光保存，两年有效；冰袋运输，请勿冷冻 产品形态 液体，PBS 缓冲液
二、靶标背景 · CD3ε
CD3ε（CD3 epsilon chain）是人 CD3/T 细胞抗原受体（TCR）复合物的关键信号转导亚基，分子量约 20 kDa，属于免疫球蛋白超家族（IgSF）成员。CD3 复合物由 ε、γ、δ、ζ 四条链组成异源多聚体，与 TCRαβ 或 TCRγδ 共同构成 T 细胞表面的抗原识别与信号转导装置。
CD3ε 是一种非糖基化 I 型跨膜蛋白，胞外段含有一个 Ig 样结构域，胞内段含有一个免疫受体酪氨酸活化基序（ITAM），在 TCR 识别抗原后通过 ITAM 磷酸化启动下游信号级联，是 T 细胞激活的分子基础。
表达分布：外周血 70-80% 淋巴细胞（主要为成熟 T 细胞和 NK T 细胞）；胸腺中 60-85% 胸腺细胞。
别名：T3、T3E、TCRE
Gene ID：916
SwissProt：P09693（CD3E）
分布：成熟 T 细胞、NK T 细胞、胸腺细胞分化各阶段
三、克隆号信息 · UCHT1
UCHT1 是流式细胞术领域应用广泛的抗人 CD3 单克隆抗体克隆号之一，特异性识别 CD3ε 链上的表位。UCHT1 标记几乎所有成熟 T 细胞，是 T 细胞免疫表型分析中通用的"总 T 细胞"标记物。
与 OKT3 克隆的区别：OKT3 和 UCHT1 均靶向人 CD3ε，但识别的表位不同。UCHT1 在部分多色 Panel 中表现出更低的非特异性背景染色，且 OKT3 克隆已知可能阻断某些下游检测抗体（如部分 CD3 功能实验），而 UCHT1 在这方面的干扰更小。选择克隆号时需根据具体实验设计和 Panel 搭配来决定。
典型应用：T 细胞总量鉴定、T 细胞亚群分析中与 CD4/CD8 联合使用、免疫监测 Panel 中的 T 细胞门控标记、CAR-T 细胞表型分析中的 T 细胞确认。
四、荧光素信息 · FITC
FITC（Fluorescein Isothiocyanate，异硫氰酸荧光素）是流式细胞术中经典的绿色荧光染料，激发峰 498 nm、发射峰 526 nm，由 488 nm 蓝光激光器激发。
光谱特征：
参数 数值 激发波长 498 nm 发射波长 526 nm（绿色） 激光器 Blue Laser（488 nm） 检测通道 FITC-A / FL1（530/30 nm 滤光片） Stokes 位移 ~28 nm
多色 Panel 搭配建议：FITC 发射光谱较宽（526 nm），与 PE（578 nm）存在光谱溢出，需做荧光补偿。常见搭配组合：
• FITC-CD3 + PE-CD4 + PerCP-Cy5.5-CD8 → 经典 T 细胞亚群三标
• FITC-CD3 + PE-CD4 + APC-CD8 → 三激光方案，光谱分离更好
• FITC-CD3 + PE-CD4 + APC-CD8 + PerCP-Cy5.5-CD45 → 四色 T 细胞 Panel
• FITC-CD3 + PE-CD34 → T 细胞 + 造血干/祖细胞联合分析注意事项：FITC 的荧光强度受 pH 影响（pH < 6.5 时荧光显著减弱），确保染色缓冲液 pH 在 7.0-7.4 范围内。FITC 对光敏感，操作过程中注意避光。
五、流式染色 Protocol
所需试剂：
• NF0003 细胞染色缓冲液（PBS + 0.5-1% BSA + 0.05% NaN₃）
• NF0004-5 7-AAD 溶液（死细胞排除，选做）
• Fc 受体封闭试剂（含单核/巨噬/B/NK 细胞样本推荐添加）
操作步骤：
Step 1 · 制备单细胞悬液
收集细胞样本（脾脏、淋巴结、胸腺、骨髓或体外培养细胞），在细胞染色缓冲液（NF0003）中制备单细胞悬液。体外培养细胞用染色缓冲液洗涤一次并重悬。调整细胞浓度为 5-10 × 10⁶ cells/mL，分装 100 µL/tube（5-10 × 10⁵ cells/tube）。
Step 2 · Fc 受体封闭
巨噬细胞、单核细胞、粒细胞、B 细胞、树突状细胞等表达 Fc 受体，会与抗体 Fc 段非特异性结合，干扰结果。推荐加入 Fc 受体封闭剂，每管 5 µL，室温孵育 5-10 min，不用洗涤。
Step 3 · 抗体染色
每管加入 5 µL FITC Anti-human CD3（UCHT1）抗体，轻柔混匀，冰上避光孵育 20-30 min。不同样本可做滴定实验确定最适浓度。
Step 4 · 洗涤
用 1 mL 细胞染色缓冲液洗涤 1 次。
Step 5 · 死细胞排除（选做）
重悬细胞于 100 µL 染色缓冲液，加入 5 µL（0.25 µg）7-AAD（NF0004-5），冰上避光孵育 5-10 min。
Step 6 · 洗涤
用 1 mL 细胞染色缓冲液洗涤 1 次。
Step 7 · 上机检测
重悬细胞于 200-300 µL 细胞染色缓冲液中，流式细胞仪检测。FITC 通道选择 FL1（530/30 nm）。
六、对照设置指南
对照类型 用途与说明 空白对照（未染色） 评估细胞自发荧光，用于调节 PMT 电压 单染/单阳性对照 多色 Panel 中用于调节荧光补偿，每种荧光素各设一管 同型对照 FITC 标记的 Mouse IgG1, κ 同型抗体，消除非特异性背景染色。推荐货号：见 NeoMab 同型对照产品线 FMO 对照（Fluorescence Minus One） 多色 Panel 中去除某一种荧光素，用于准确设门，特别是连续变量群体
七、质量数据与参考文献
每批产品均经过严格质控，包括但不限于：SDS-PAGE 纯度检测、流式细胞术功能验证（人外周血单个核细胞染色）、内毒素检测（< 0.25 EU/µg）、无菌检测。批间一致性保证实验可重复性。
参考文献：
1. Van de Griend RJ, et al. J Immunol. 1981;127(5):2064-2071.
2. Kung PC, et al. Science. 1979;206(4416):347-348.
3. Borst J, et al. Nature. 1984;312(5994):611-613.
4. Clevers H. Cell. 2004;117(4):469-482.
八、相关产品
同靶标 · 不同荧光素（人 CD3）：
• 12-1003-1 PE Mouse Anti-human CD3 (OKT3) — PE 标记，橙红荧光，Ex/Em 564/578 nm
• 16-1003-1 APC Mouse Anti-human CD3 (OKT3) — APC 标记，远红荧光，Ex/Em 650/660 nm
• 26-1003-2 AF647 Mouse Anti-human CD3 (UCHT1) — AF647 标记，远红荧光，Ex/Em 650/668 nm
• 10-1003-2 Biotin Mouse Anti-human CD3 (UCHT1) — 生物素标记，搭配链霉亲和素荧光素使用
• CF0043 Anti-Human CD3 Functional Grade (OKT3) — 功能级，用于 T 细胞激活实验
同靶标 · 不同克隆号：
• 11-1003-1 FITC Mouse Anti-human CD3 (OKT3) — FITC 标记，OKT3 克隆
T 细胞 Panel 常用搭配：
• 11-1004-1 FITC Mouse Anti-human CD4 (OKT4) — CD4+ T 细胞标记
• 11-2003-1 FITC Rat Anti-mouse CD3 (17A2) — 小鼠 CD3 检测（跨物种对照）
配套试剂：
• NF0003 细胞染色缓冲液 — PBS + BSA + NaN₃，流式染色专用
• NF0004-5 7-AAD 溶液 — 死细胞排除染料
九、常见问题 · FAQ
Q: 11-1003-2 的同型对照选什么？
A: 选择 FITC 标记的 Mouse IgG1, κ 同型抗体。UCHT1 是 Mouse IgG1, κ 亚型，同型对照的宿主、亚型和偶联物需完全一致，以消除 Fc 段非特异性结合和 FITC 自发荧光的干扰。
Q: UCHT1 和 OKT3 克隆有什么区别？该怎么选？
A: 两者都靶向人 CD3ε，都能标记成熟 T 细胞。主要区别：① 识别表位不同，OKT3 可能干扰部分下游抗体结合（如某些 CD3 功能实验），UCHT1 这方面干扰较小；② 文献中 UCHT1 在非特异性背景方面表现更稳定。建议根据已有 Panel 和文献参考选择，新 Panel 设计可优先试 UCHT1。
Q: 11-1003-2 可以用于免疫荧光（ICC/IF）吗？
A: 本产品已验证应用为 Flow Cytometry。FITC 标记抗体理论上可用于免疫荧光，但未经过本公司 ICC/IF 验证，建议先做预实验确认工作浓度和特异性。如需 ICC/IF 验证产品，可咨询技术支持。
Q: 全血样本可以直接染色吗？
A: 可以。根据说明书，推荐用量为 5 µL 抗体 / 100 µL 全血。染色后需做裂红处理（裂解红细胞）再上机，否则红细胞会干扰白细胞检测。裂红后注意洗涤彻底，避免裂红液残留影响荧光信号。
Q: 抗体可以冻存吗？
A: 不建议。说明书明确要求"请勿冷冻"，冻融会导致 FITC 荧光猝灭和抗体聚集。保存条件为 2-8℃ 避光，两年有效期内性能稳定。
Q: 11-1003-2 可以用于小鼠 T 细胞检测吗？
A: 不可以。UCHT1 克隆特异性识别人 CD3ε，不交叉反应小鼠 CD3。小鼠 T 细胞检测请使用 11-2003-1 FITC Rat Anti-mouse CD3 (17A2)（Rat 抗 Mouse CD3）。
Q: 多色 Panel 中 FITC 的补偿怎么做？
A: FITC 发射光谱较宽（峰值 526 nm，半峰宽 ~40 nm），主要溢出到 PE 通道（578 nm）。补偿步骤：① 用单染管（仅 FITC-CD3）获取 FITC-A vs PE-A 散点图；② 调节 FITC → PE 补偿值直到 PE 通道阳性群与阴性群中位值一致；③ 建议用补偿微球代替细胞做补偿，减少批次差异。
十、技术支持
NeoMab 隶属信天翁生物科技（广州）有限公司，专注于流式抗体和免疫学试剂研发。
• 客服电话：400-090-1923
• 技术支持邮箱：service@gooniebio.com
• 公司官网：www.gooniebio.com
• 地址：广州市黄埔区瑞和路39号纳金科技园
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产品组成：
货号/规格 组分名称 体积 11-1003-22 25T FITC Mouse Anti-human CD3 Antibody（UCHT1） 125 μL 11-1003-25 100T FITC Mouse Anti-human CD3 Antibody（UCHT1） 500 μL 保存：2-8℃避光保存。冰袋运输。
关键词
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货号：15-1008A-1
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种属反应性：Mouse
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