小鼠脾脏单细胞悬液制备视频教程
一、实验前准备
进行脾脏单细胞悬液制备前，建议先准备好所需的材料和试剂。
- 无菌培养皿（35 mm规格，组织处理用；若同时处理多个脾脏，可选用100 mm规格）
- 无菌注射器（3 cc规格，去除活塞后用作研磨工具）
- 50 mL锥形离心管
- 70 μm细胞过滤器。
用于解离和洗涤的缓冲液，推荐使用FiniGet分必得®配套的细胞分选缓冲液[产品号： 140-2001]；若后续不立即进行细胞分选，也可使用含1 mM EDTA的磷酸盐缓冲液（PBS）作为替代。
二、脾脏组织的机械解离
获得新鲜的小鼠脾脏后，应尽快开始处理，以维持细胞活力。首先，将脾脏转移至盛有5 mL推荐解离缓冲液（如FiniGet分必得®细胞分选缓冲液）的35 mm无菌培养皿中。在解剖显微镜或良好的照明下，仔细剔除脾脏上附着的多余结缔组织和脂肪，剔除的时候观察并记录脾脏是否有肿大、色泽异常或病灶等特殊情况。脾脏的状态对后续细胞分选的效果有很重要的影响。
接下来进行机械解离。取一支3 cc无菌注射器，拔出其活塞/柱塞，使用活塞扁平的一端作为研磨工具。手持活塞柄部，以画圈的方式温和地研磨脾脏组织，大约进行5次研磨即可。此步骤的目的是破坏脾脏的被膜和实质结构，将脾细胞释放到缓冲液中，操作时注意力度适中，避免过度损伤细胞。
三、单细胞悬液的制备与纯化
将一只70 μm细胞过滤器稳妥地放置在50 mL无菌锥形管上。先用2 mL FiniGet分必得®细胞分选缓冲液或PBS润洗滤网，这能有效减少滤网干燥导致的细胞黏附，提高细胞回收率。
用移液器吹散脾脏组织块和细胞悬液，使其混合均匀。随后用细胞筛网过滤悬液。使用另一支新的3 cc无菌注射器的活塞末端，以画圈的方式轻柔地帮助细胞和组织碎片通过滤网。之后，用缓冲液冲洗滤网，重复过滤和冲洗步骤一次。完成过滤后，将残留的组织碎片和滤网一并弃去。
用PBS或分选缓冲液补足试管中细胞悬液的体积，然后以300 × g离心10分钟。离心结束后，小心地吸去上清液，注意不要扰动管底的细胞沉淀。根据后续实验需求，用缓冲液重悬细胞，即可获得可用于下游实验的脾脏单细胞悬液。如有必要，可使用缓冲液重复洗涤一次。
至此，一份质量可靠的脾脏单细胞悬液便制备完成。该样本可直接用于后续的细胞计数、流式细胞术分析，或配合FiniGet分必得®无柱阴性分选试剂盒进行各类免疫细胞的分选实验，例如T细胞分选、B细胞分选等，为CAR-T、免疫细胞共培养等前沿研究提供高质量的细胞材料。
常见问题解答 (FAQ)
制备脾脏单细胞悬液时，如何提高细胞活率？
关键在于操作温和与速度。解离时使用注射器活塞末端轻柔画圈研磨，避免暴力捣碎。过滤时避免用力挤压组织，让细胞自然通过滤网。
过滤时细胞过滤器堵塞怎么办？
可能是组织碎片过多或细胞悬液过于粘稠。可以尝试先低速离心（如50 × g, 1分钟）去除大块碎片，再取上清进行过滤；或在过滤时用缓冲液多次冲洗滤网，帮助细胞顺利通过。
本方法制备的细胞是否适用于免疫磁珠分选？
是的。该流程专门为后续细胞分选实验设计。制备好的单细胞悬液可以直接衔接FiniGet分必得®无柱阴性分选试剂盒，通过免疫磁珠分选技术高效获取高纯度的目的细胞群。
如何判断制备的细胞悬液质量是否合格？
可取少量细胞悬液，加入台盼蓝染液进行染色，并在显微镜下用血球计数板计数。活细胞不着色，死细胞染成蓝色。活细胞比例应高于90%，且无明显细胞团块，即为合格的单细胞悬液样本。
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