一步法细胞总RNA提取试剂盒
应用：
种属反应性：
宿主种属：
5分钟极速提取，高效捕获total RNA（含200 bp以下小RNA）
一键复制信息
- 产品描述
- 组成成分
- 注意事项
-
本试剂盒为一步法细胞总RNA提取试剂盒，基于硅胶膜纯化技术，搭配独特的裂解结合液（CRL Buffer），细胞裂解后一步上柱，再经优化的漂洗步骤去除蛋白、盐离子等杂质，有助于获得高质量总RNA。产物可直接用于RT-PCR、qRT-PCR、Northern Blot、Dot Blot、体外翻译和高通量测序等分子生物学实验。所有试剂组分室温（15-25℃）运输和存储，保质期一年。
核心优势
1. 一步上柱，流程更简
CRL Buffer兼具裂解与结合功能，细胞裂解后直接将裂解产物转入GA2吸附柱，无需另外加入乙醇或结合液，操作步骤更少，有助于减少操作过程中的RNA损失和污染机会。
2. 贴壁细胞可直接在皿内裂解
去除培养基后直接在培养皿或培养板中加入CRL Buffer，反复吹打即可使细胞脱落裂解，无需胰酶消化（也可消化后按悬浮细胞处理）。6孔板每孔或直径3.5cm平皿（约10cm²培养面积）加500μL即可覆盖。
3. 硅胶膜纯化，双Buffer漂洗
RNA结合到硅胶膜后，经RNA Washing Buffer 1和Buffer 2两步漂洗，有效去除蛋白、盐离子等杂质；空离后用RNase-free ddH2O洗脱，所得总RNA纯度好，可直接进入下游实验。
4. 全程室温操作，存储方便
提取过程在室温进行，无需预冷试剂或低温离心；所有试剂组分均在室温（15-25℃）条件下运输和存储，保质期一年，实验室取用和备货都方便。
5. 下游应用广泛
提取的总RNA适用于RT-PCR、qRT-PCR、Northern Blot、Dot Blot、体外翻译和高通量测序等多种分子生物学实验。
性能实测数据
操作流程
实验前准备
首次使用前，按下表向两瓶Washing Buffer中加入无水乙醇，加后及时打钩标记，避免重复加入：
组分 无水乙醇加入量 RNA Washing Buffer 1（400-109B） 36 mL RNA Washing Buffer 2（400-109C） 45 mL 稀释后室温保存。以下过程均在无RNase污染的实验环境中进行。
样本前处理
悬浮细胞：收集细胞后600×g、4℃离心4分钟，弃上清收集细胞沉淀；每少于5×10^6个细胞加入500μL CRL Buffer，涡旋振荡直至肉眼看不到明显细胞团块。
贴壁细胞：吸去培养基后，可直接在培养皿中裂解——常规6孔板每孔或直径3.5cm平皿（约10cm²培养面积）加入500μL CRL Buffer，使其充分覆盖细胞表面，用移液器反复吹打使细胞脱落；也可用胰蛋白酶消化后按悬浮细胞流程处理。贴壁较紧的细胞需增加吹打次数，直至细胞完全脱落、充分裂解。
细胞量较多或使用直径10cm培养皿时，建议将裂解液增加至1~2mL。
RNA提取（6步）
第1步 · 上柱：将裂解产物全部转移至GA2吸附柱（含收集管）中，13,000×g离心30秒，弃废液。注意：上柱前切勿离心取上清。
第2步 · 漂洗1：向吸附柱加入500μL RNA Wash Buffer 1（首次使用前已加无水乙醇），13,000×g离心30秒，弃废液。
第3步 · 漂洗2：向吸附柱加入500μL RNA Wash Buffer 2（首次使用前已加无水乙醇），13,000×g离心30秒，弃废液。
第4步 · 空离：将吸附柱放回收集管，13,000×g空离1分钟，去除残留洗液。
第5步 · 洗脱：将吸附柱转移至新的1.5mL RNase-free离心管（自备），向膜中央悬空滴加20~100μL RNase-free ddH2O，室温孵育1分钟，13,000×g离心30秒洗脱RNA。
第6步 · 保存：提取的Total RNA可直接用于下游实验，或于-80℃保存。
小体积洗脱浓度更高，但洗脱可能不充分；大体积洗脱更充分，但浓度会降低。二次洗脱可获得更高的RNA产量，可根据下游需求选择。
适用样本与下游应用
样本类型 CRL Buffer用量 处理方式 悬浮细胞（<5×10^6个） 500 μL 600×g 4℃离心4分钟收沉淀，涡旋裂解 贴壁细胞（6孔板/3.5cm皿，约10cm²） 500 μL 皿内直接裂解吹打，或胰酶消化后按悬浮处理 10cm培养皿/细胞量较多 1~2 mL 增加裂解液用量，保证充分覆盖裂解 下游实验适配：RT-PCR、qRT-PCR、Northern Blot、Dot Blot、体外翻译、高通量测序。
样本选型提示：本试剂盒为细胞样本设计。动物组织样本请选择动物组织总RNA提取试剂盒（400-103）；细胞样本也可选用细胞总RNA快速提取试剂盒（400-100）。
常见问题 FAQ
Q：400-109一步法试剂盒和400-100有什么区别？
A：400-109为一步法细胞专用试剂盒，裂解液即裂解结合液（CRL Buffer），细胞裂解后直接将裂解产物转入吸附柱，无需另外加入乙醇或结合液；400-100裂解后需加入等体积无水乙醇混匀再上柱。两者均为硅胶膜柱式、室温操作。组织样本请选择动物组织总RNA提取试剂盒（400-103）。
Q：提取的RNA浓度低、产量低怎么办？
A：常见原因与处理：①样本过少或样本本身RNA含量低，可增加样本投入量；②细胞裂解不充分，需涡旋振荡至无明显细胞团块，贴壁细胞增加吹打次数至完全脱落；③上柱前切勿离心取上清，否则会丢失RNA，低速瞬离后将裂解产物全部转移至吸附柱即可。
Q：提取的RNA发生降解是什么原因？
A：①样本保存不当或反复冻融，请尽量使用新鲜样本；②培养基残留过多会抑制裂解液失活RNase的能力，建议将培养基吸弃干净；③电泳或环境存在RNase污染，电泳前可将电泳槽用3%双氧水浸泡20分钟，或用RNA酶/核酸清除剂处理5分钟后用RNase-free ddH2O冲洗。
Q：A260/230偏低或下游实验受抑制怎么办？
A：盐离子残留时，可增加一次RNA Wash Buffer 2漂洗，并沿吸附柱管壁四周加入洗液，或加液后颠倒混匀2~3次，有助于冲洗管壁盐分；乙醇残留时，空离时间延长至3~5分钟，或开盖放置3~5分钟使乙醇充分挥发后再洗脱。
Q：产物有基因组DNA污染怎么办？
A：多为细胞样本投入量过多所致，可适当减少投入量；也可使用DNase I在膜上进行消化处理。逆转录前建议进行gDNA去除（可搭配含gDNA去除酶的逆转录试剂盒500-101）。
Q：贴壁细胞需要胰酶消化后再提取吗？
A：不一定。去除培养基后可直接在培养皿/培养板中加入CRL Buffer覆盖细胞表面，用移液器反复吹打使其脱落；也可以胰蛋白酶消化后按悬浮细胞流程处理。贴壁较紧的细胞需增加吹打次数，直至细胞完全脱落、充分裂解。
Q：洗脱体积怎么选择？
A：向吸附柱膜中央悬空滴加20~100μL RNase-free ddH2O洗脱。小体积洗脱浓度更高但洗脱可能不充分，大体积洗脱更充分但浓度会降低；二次洗脱可获得更高的RNA产量，可根据下游实验对浓度和总量的要求选择。
Q：试剂盒如何保存？保质期多久？提取的RNA怎么保存？
A：试剂盒所有组分均在室温（15-25℃）条件下运输和存储，保质期为一年。首次使用前需向RNA Washing Buffer 1加入36mL、向RNA Washing Buffer 2加入45mL无水乙醇，加后及时标记。提取后的Total RNA可直接用于下游实验，或于-80℃保存。
Q：提取的RNA可以用于哪些下游实验？
A：提取的总RNA可直接用于RT-PCR、qRT-PCR、Northern Blot、Dot Blot、体外翻译和高通量测序等分子生物学实验。
技术支持
如有产品使用、样本适用性或数据问题，欢迎联系信天翁生物技术团队获取支持。
联系渠道 信息 咨询热线 400-090-1923 官方邮箱 service@gooniebio.com 官网 www.gooniebio.cn 地址 广州市黄埔区瑞和路39号纳金科技园 相关产品
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品牌：GOONIE｜核酸提取与PCR试剂 ｜ 出品：信天翁生物科技（广州）有限公司
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产品组成
产品编号
组分
100T
400-109A
CRL buffer
52.5 mL
400-109B
RNA Washing Buffer 1
24 mL
400-109C
RNA Washing Buffer 2
15mL
400-109D
RNase-free ddH2O
10.5 mL
400-109E
GA2吸附柱（含收集管）
100套
第一次使用前请先在RNA Washing Buffer 1和RNA Washing Buffer 2中加入指定量无水乙醇，加入后请及时打钩标记已加入乙醇，以免多次加入！
实验前准备
按照下表提示，用【无水乙醇】对RNA Washing Buffer 1和RNA Washing Buffer 2进行稀释，稀释后室温保存；
组分
无水乙醇加入量
Washing Buffer 1
36 mL
Washing Buffer 2
45 mL
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注意事项
- 使用本产品时应注意做好个人防护，如防护服装、手套、眼罩、面罩等。
- 本试剂盒仅供科学研究使用，不得用于体外诊断。
- 使用本产品时应注意做好个人防护，如防护服装、手套、眼罩、面罩等。
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