通用型植物总RNA 提取试剂盒(多糖多酚植物样本适用)
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17min快速提取 无需DTT,无需加热
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产品规格总表
产品名称 通用型植物总RNA提取试剂盒(多糖多酚植物样本适用) 货号 400-108 规格 50T/盒 品牌 GOONIE 厂家 信天翁生物科技(广州)有限公司 保质期 一年 提取时间 约17分钟 适用样本 普通植物组织(幼嫩叶片、茎、根)、多糖多酚植物(土豆、红薯、松针、棉花叶片等)、水果果肉 保存条件 DNase I及DNase I Buffer -20℃保存、4℃运输;其余试剂及组分室温(15-25℃)运输保存 下游应用 RT-PCR、荧光定量PCR、RNA建库、芯片分析、Northern Blot、Dot Blot、分子克隆 产品组成
产品编号 组分 规格(50次) 400-108A Lysis Buffer A 40 mL 400-108B Lysis Buffer B 40 mL 400-108C CB Buffer 50 mL 400-108D Wash Buffer 12 mL 400-108E Elution Buffer 10 mL 400-108F DNase I 100 μL 400-108G DNase I Buffer 5 mL 400-108H RNA结合柱(含收集管) 50套 核心优势
双裂解液体系,针对性应对复杂样本
Lysis Buffer A适用于多数普通植物组织(幼嫩叶片、茎、根)及多酚含量较高的样本(月季花瓣、茶树叶片、柑橘叶片);Lysis Buffer B专为高淀粉含量样本(土豆、红薯、板栗)及复杂多酚类样本(松针、棉花叶片)优化,避免样本裂解后形成胶状物,有助于保证RNA释放效率。两种体系相互补充,应对常规及疑难植物样本。
柱上DNase I消化,降低基因组污染
整合DNase I柱上消化步骤,在RNA结合柱上直接完成DNA去除,操作简便。标准消化时间5分钟,可延长至10分钟,灵活控制残留水平,有助于保障RNA纯度满足RT-PCR、荧光定量PCR、RNA建库等高灵敏度实验要求。
操作流程简化,17分钟完成提取
摒弃传统酚氯仿抽提及醇类沉淀步骤,整个提取流程仅需约17分钟。操作步骤清晰、衔接紧凑,有助于缩短实验周期,同时减少样本在操作过程中的降解风险。
全程无毒试剂,操作更简便
全程不接触酚氯仿、β-巯基乙醇、DTT等有毒试剂,无需通风橱操作,实验过程更安全便捷。
裂解液选择指南
由于植物次生代谢产物种类多样,单种裂解液通常无法覆盖不同的植物样本,故试剂盒提供了两种不同裂解液。Lysis Buffer A针对的样本类型更加广泛,但在遇到高淀粉含量的植物样本时会生成胶状物质妨碍提取,在一些高多糖样本中也可能与多糖共沉淀导致提取失败。Lysis Buffer B通常能正常提取高淀粉含量的植物样本,但在简单植物样本中提取产量可能偏低。在明确不是高淀粉类、高多糖类样本情况下,建议优先尝试用Lysis Buffer A进行提取,或用两种Buffer先进行一次预实验确定合适的Buffer。
样本类型 推荐投入量 样本举例 推荐裂解液 普通植物组织(幼嫩叶片、茎、根) 50-100 mg 小麦、水稻、拟南芥、烟草、玉米、生菜、香菜、油菜 Lysis Buffer A 淀粉、多糖含量高的植物组织 50-100 mg 土豆、红薯、板栗、马蹄、芋头、香蕉、金针菇 Lysis Buffer B 多酚含量高植物组织 50-100 mg 月季花瓣、山茶花瓣、茶树叶片、柑橘叶片、草莓叶片 Lysis Buffer A 复杂多酚类组织 50-100 mg 松针、棉花叶片 Lysis Buffer B 水果果肉 100-200 mg 草莓、柑橘、苹果 Lysis Buffer A 操作流程
1. 样本处理
称取50-100 mg植物组织,加入液氮后用研钵磨成粉末,或液氮速冻后用冷冻研磨仪快速将样品研磨成粉末。研磨应尽可能充分快速,并保证低温,以防止RNA降解。
2. 样本裂解
迅速向研磨好的植物样品粉末中加入600 μL的Lysis Buffer A或Lysis Buffer B(根据样本选择一种裂解液,若不确定,可先用两种裂解液都进行测试,然后再选择合适的),剧烈涡旋振荡30秒,使样本与裂解液充分混合均匀,然后13,000 × g室温离心5 min。
3. RNA结合
弃去沉淀,将上一步离心后的上清转入一个新的干净的离心管(部分样品上层会有漂浮的固体类或油脂类杂质,则吸取中间层澄清液体),并加入0.5倍上清体积的无水乙醇,用移液器吹打6-8次混匀,然后将混合液转入RNA结合柱(结合柱先套入收集管中),13,000 × g室温离心30秒。
4. 柱清洗
(1)弃滤液,向RNA结合柱(含收集管)中加入750 μL的CB Buffer(首次使用前需加入对应量无水乙醇),13,000 × g室温离心30秒。(2)弃滤液,向RNA结合柱(含收集管)中加入500 μL的Wash Buffer(首次使用前需加入对应量无水乙醇),13,000 × g室温离心30秒。
5. gDNA消化
弃滤液,按下表比例配制DNase I反应液:
组分 用量(单个样品) DNase I Buffer 100 μL DNase I 2 μL 将配好的DNase I反应液加98 μL到RNA纯化柱膜中央,室温放置5分钟(切勿离心,必须按照下一步加入CB Buffer以后才能离心)。此用量和反应时间通常能够去除大部分gDNA,如对gDNA去除要求特别高,可延长反应时间至10分钟。若实验对gDNA残留不敏感,可直接跳过此步骤。
6. 二轮柱清洗
(1)向RNA结合柱(含收集管)中加入750 μL的CB Buffer,13,000 × g室温离心30秒。(2)弃滤液,向RNA结合柱(含收集管)中加入500 μL的Wash Buffer,13,000 × g室温离心30秒。
7. 空管离心
弃滤液,将RNA结合柱放回收集管,13,000 × g室温空管离心30秒。
8. RNA洗脱
弃收集管,将RNA结合柱转入新的1.5 mL RNase-free离心管中,向RNA纯化柱柱膜中央悬空滴加30-100 μL的Elution Buffer,室温放置2分钟,13,000 × g室温离心1分钟。弃纯化柱,1.5 mL离心管中产物即为RNA产物,立即进行下游实验或置于-80℃保存。
注意事项
1. 首次使用前,必须向CB Buffer中加入50 mL无水乙醇,向Wash Buffer中加入48 mL无水乙醇,并充分摇匀。
2. Lysis Buffer若因低温出现结晶析出,于55℃温水孵育至澄清即可正常使用。
3. 建议使用无RNA酶的耗材,并在超净工作台中对Elution Buffer进行小份分装,避免反复取用造成污染。
4. 对于珍稀或提取难度较高的样本,建议正式实验前先进行小规模预实验,确认提取效果后再扩大样本量。
5. 本产品仅用于科研,不可用于诊断。
性能实测数据
以下为部分代表性植物样本的提取数据,完整数据请参阅新品上市文章。
普通植物根茎及叶片
样本 A260/A280 A260/A230 浓度(ng/μL) 得率(μg/10 mg) 91mg水稻叶 2.085 2.365 1273.72 8.41 97mg小麦叶 2.088 2.347 724.512 4.47 97mg茄子叶 2.109 2.4 1844.19 11.4 100mg拟南芥叶 2.09 2.262 328.455 2.0 80mg龙井茶叶 2.046 2.254 283.743 2.16 多糖多酚植物
样本 A260/A280 A260/A230 浓度(ng/μL) 得率(μg/10 mg) 100mg土豆块茎 2.106 2.372 488.354 1.95 60mg红薯 2.095 2.466 505.626 3.37 100mg松针 2.046 2.301 276.283 1.11 75mg棉花叶 2.135 2.608 483.725 2.58 95mg鲜板栗 2.094 2.411 953.970 4.02 RNA电泳图

土豆块茎、红薯块茎、金针菇、松针、小麦叶RNA电泳图
常见问题 FAQ
Q:Lysis Buffer出现浑浊或结晶析出,还能正常使用吗?
A:可以。Lysis Buffer受温度变化的影响可能会因结晶析出而变浑浊,属于正常现象。使用前将瓶置于55°C温水孵育,偶尔摇动,直至溶液完全恢复澄清透明即可正常使用,不影响提取效果。
Q:Lysis Buffer A和Lysis Buffer B应该如何选择?
A:若样本为常规幼嫩组织(水稻、拟南芥、烟草等)或多酚类样本(花瓣、茶树叶等),优先选择Lysis Buffer A。若为高淀粉含量样本(土豆、红薯、板栗)或复杂多酚类样本(松针、棉花叶片),则建议使用Lysis Buffer B。对于不确定类型的样本,可分别用两种裂解液进行小量预实验,根据提取效果确定最优方案。
Q:DNase I消化步骤是否可以省略?
A:如果下游实验对基因组DNA残留不敏感,可以跳过此步骤以缩短操作时间。但对于荧光定量PCR、RNA建库等高灵敏度实验,强烈建议执行DNase I柱上消化,标准消化5分钟即可去除大部分gDNA,若对残留要求极高可延长至10分钟。
Q:RNA洗脱时Elution Buffer的用量如何选择?
A:推荐用量为30-100 μL。若预期RNA产率较低,建议使用30-50 μL以获得较高浓度的RNA产物;若样本RNA丰度高,可适当增加洗脱体积以提高回收率。需注意,减少洗脱体积会相应降低洗脱效率,建议根据样本类型和实验需求进行优化。
Q:提取的RNA如何保存?
A:建议洗脱后立即进行下游实验。如需保存,可置于-80°C冰箱冻存。应避免反复冻融,以免造成RNA降解。首次使用Elution Buffer前,建议在超净工作台中小份分装,防止多次取用引入RNase污染。
Q:针对珍稀或难提样本,有什么建议?
A:对于珍稀样本或首次尝试的复杂样本,强烈建议先用少量样本进行预实验,确认提取效果(包括产率、纯度和完整性)后再放大到正式实验用量。这样可以避免珍贵样本的浪费。
技术支持
如有产品使用、样本适用性或应用优化问题,欢迎联系信天翁生物技术团队获取支持。
咨询热线 400-090-1923 官方邮箱 service@gooniebio.com 官网 www.gooniebio.cn 地址 广州市黄埔区瑞和路39号纳金科技园 相关产品
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产品组成
产品编号 组分 规格(50次) 400-108A Lysis Buffer A 40 mL 400-108B Lysis Buffer B 40 mL 400-108C CB Buffer 50 mL 400-108D Wash Buffer 12 mL 400-108E Elution Buffer 10 mL 400-108F DNase I 100 μL 400-108G DNase I Buffer 5 mL 400-108H RNA结合柱(含收集管) 50套 -
注意事项
1. 首次使用前,请严格按照说明书要求向CB Buffer和Wash Buffer中加入指定体积的无水乙醇。
2. Lysis Buffer若因低温出现结晶析出,于55°C温水孵育至澄清即可正常使用。
3. 建议使用无RNA酶的耗材,并在超净工作台中对Elution Buffer进行小份分装,避免反复取用造成污染。
4. 对于珍稀或提取难度较高的样本,建议正式实验前先进行小规模预实验,确认提取效果后再扩大样本量。
关键词
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