CD3 分选是什么？分必得 CD3 分选原理、应用
发布时间:2026-09-04
在免疫学研究和细胞治疗开发中，CD3 分子扮演着重要角色。它由 CD3δ、CD3ε、CD3γ、CD3ζ 四条链构成，并与 T 细胞受体（TCR）非共价结合，形成稳定的 TCR-CD3 复合物。这一复合物是所有成熟 T 细胞表面的标志，如同 T 细胞的"身份证"，不仅用于鉴定 T 细胞谱系，更是 T 细胞活化信号传导的核心枢纽。当抗原递呈细胞上的 MHC-抗原肽复合物与 TCR 结合时，CD3 分子胞内段的免疫受体酪氨酸活化基序（ITAM）发生磷酸化，启动下游信号级联反应，调控 T 细胞的增殖、分化与免疫应答强度。
因此，在开展 T 细胞功能研究、单细胞测序、CAR-T 细胞制备等前沿工作时，第一步往往需要通过 细胞分选 技术，从外周血单个核细胞（PBMC）、脾脏、淋巴结等复杂样本中，精准分离出纯净的 CD3+ T 细胞。CD3 分选的质量，直接决定了后续实验数据的可靠性与细胞治疗产品的有效性。
当前主流的免疫磁珠分选技术，以其温和、有效的特点，已成为实验室分离特定细胞亚群的常用方法之一。其中，基于无柱阴性分选原理开发的 FiniGet分必得®人 CD3+ T 细胞分选试剂盒（120-6001），为科研工作者提供了一种兼顾高纯度与高活性的细胞分选解决方案。
免疫磁珠分选的核心，是利用抗体-抗原特异性反应与磁场物理分离的结合。具体而言，在细胞悬液里加入特异性识别细胞表面标志物的单克隆抗体，会特异性地"标记"目标细胞或非目标细胞。再加入链霉亲和素磁珠和抗体结合，随后将样品置于强磁场中，被磁珠标记的细胞会吸附于磁极或分选柱上，而未标记的细胞则可以被轻松移除，从而实现目标细胞的富集或去除。
采用生物素-链霉亲和素免疫磁珠负选技术，不标记目标 CD3⁺ T 细胞，标记清除杂细胞，全程无需分选柱，普通磁力架即可完成分离。
抗体混合液（Cocktail）：生物素标记多种抗体，特异性结合样本中非 CD3⁺ 杂细胞（B 细胞、NK 细胞、单核细胞、粒细胞等）；
加入链霉亲和素纳米磁珠，通过生物素-链霉亲和素相互作用，把杂细胞结合上磁珠；
放置磁力架，带磁珠的杂细胞被吸附在管壁；
直接收集上清液，上清即为无磁珠、无抗体标记的 CD3⁺ T 细胞。
核心优势：目的细胞保持天然表面抗原，不会发生抗体介导的异常激活，适合 T 细胞功能实验，约 15 分钟完成分选。
1、基础免疫研究：T 细胞增殖、活化、凋亡、细胞因子分泌功能检测；T 细胞亚群分群、Treg 细胞研究；流式表型分析、RNA 提取、单细胞测序、转录组分析。
2、肿瘤免疫研究：肿瘤微环境、肿瘤浸润淋巴细胞 TIL 相关研究；免疫检查点（PD-1、TIM-3 等）机制研究；CAR-T、TCR-T 细胞治疗前期 T 细胞纯化、体外扩增实验。
3、自身免疫病研究：类风湿关节炎、系统性红斑狼疮、I 型糖尿病等疾病 T 细胞免疫机制；患者来源 T 细胞表型、功能异常分析。
4、感染免疫研究：病毒（HBV、HIV、新冠等）感染中 T 细胞免疫应答、T 细胞耗竭、记忆 T 细胞研究。
5、移植免疫研究：移植排斥、GVHD 移植物抗宿主病机制、免疫耐受相关 T 细胞研究。
小鼠：脾脏、淋巴结单细胞悬液；人：新鲜 / 冻存 PBMC、白膜层样本。
本流程适用于处理 0.1–2 mL（多达 2×10⁸ cells）的新鲜或冻存人 PBMC 样本。使用 FiniGet分必得® 配套试剂与耗材，整个操作在室温下进行。
所需试剂盒：FiniGet分必得®人 CD3+ T 细胞分选试剂盒（120-6001）。
所需设备与耗材：FiniGet分必得® 140-2000 单孔磁力架、无菌 5 mL 流式管、移液器及无菌吸头、细胞计数板。
所需缓冲液：FiniGet分必得® 140-2001 分选缓冲液（含 1 mM EDTA、2% FBS 及 PBS）。
1、细胞重悬与计数：将新鲜分离或冻存复苏的人 PBMC 用分选缓冲液洗涤一次（离心，弃上清）。用分选缓冲液重悬细胞沉淀并计数，调整细胞密度至 1×10⁸ cells/mL。吸取 100 μL 细胞悬液（即 1×10⁷ cells）转移至一支无菌 5 mL 流式管底部。
2、抗体孵育（标记非目标细胞）：向流式管中加入 10 μL 抗体 Cocktail。轻轻吹打混匀，室温孵育 10 分钟。此步使生物素标记的抗体混合物充分结合样本中的非 CD3+ T 细胞（B 细胞、NK 细胞、单核细胞等）。
3、磁珠孵育（捕获非目标细胞）：涡旋振荡链霉亲和素磁珠至少 30 秒使其充分重悬。向细胞悬液中加入 8 μL 磁珠悬液，轻柔吹打混匀，室温孵育 2.5 分钟。
4、磁力架分离（关键步骤）：加入分选缓冲液将体积补至 2.5 mL，将流式管插入 FiniGet分必得® 140-2000 单孔磁力架中，室温静置 2.5 分钟。非目标细胞与磁珠结合形成复合物，被磁力架吸引聚集于管壁。
5、"倾倒法"收集目标细胞：保持流式管在磁力架中，缓慢、平稳地将上清液（富含未被标记的 CD3+ T 细胞）一次性倾倒至新无菌离心管。动作轻柔，避免扰动管壁复合物，确保目标细胞纯度。
6、洗涤与收集：将收集的目标细胞悬液离心，弃上清。用适量分选缓冲液或完全培养基重悬细胞沉淀，即可用于后续培养、流式分析或功能实验。
FiniGet分必得®方案的优势不仅体现在操作便捷性上，其技术细节更直接关联实验结果的可重复性与细胞质量：
该试剂盒兼容新鲜分离或冻存复苏的人 PBMC，无需红细胞裂解步骤，简化了流程并减少了对细胞的额外刺激。
试剂盒包含经过优化的抗体 Cocktail，能有效识别并标记样本中的绝大部分非 T 细胞类群。配合高亲和力的链霉亲和素磁珠与高效的磁力架，可从分选前约 60% 的纯度，提升至分选后约 99% 的高纯度（厂家流式验证数据）。
整个分选过程在室温下短时（约 15 分钟）完成，且全程不使用分离柱，避免了机械剪切力对细胞的损伤。阴性分选策略确保目标细胞表面无抗体或磁珠结合，有效避免 T 细胞激活信号通路的干扰，分选后细胞可直接用于对细胞状态敏感的下游实验，如 T 细胞培养、T 细胞激活、免疫细胞共培养或单细胞测序。
所得的高纯度、高活性 CD3+ T 细胞，是进行原代免疫细胞功能研究的理想起始物料。无论后续用于 CAR-T 工艺开发中的 T 细胞激活与扩增，还是用于探究免疫磁珠分选后细胞表型变化的流式细胞术，该方案都能提供坚实的细胞质量基础。相较于依赖细胞物理性质的密度梯度离心法，免疫磁珠分选在纯度和特异性上具有显著优势；而相比流式细胞分选（FACS），磁珠分选操作更简便、对细胞物理损伤更小，更适合大批量样本处理。
1）样本处理：确保 PBMC 分离质量，去除血小板和死细胞碎片。2）抗体孵育：检查抗体 Cocktail 是否足量、孵育时间是否充足（10 分钟）、温度是否为室温。3）磁珠孵育：磁珠使用前务必涡旋充分重悬；孵育时间（2.5 分钟）不宜过短。4）磁力分离：倾倒上清时务必轻柔，避免扰动管壁吸附的磁珠-细胞复合物；可增加一次重复分离步骤。5）细胞量：确保细胞起始量不超过试剂盒推荐范围。
1）操作轻柔：全程使用大口径吸头，避免反复剧烈吹打。2）缓冲液：使用的分选缓冲液确保含有足量 FBS 和 EDTA 以保护细胞。3）离心条件：离心力不宜过高，时间不宜过长。4）样本质量：确保起始 PBMC 样本本身活性良好，无污染或过度处理。
1）去除死细胞/DNA：若样本中死细胞较多，释放的 DNA 可能导致结块，可在分选前用 DNase I 处理细胞悬液。2）过滤：上样前务必使用 40–70 μm 细胞筛网过滤细胞悬液，去除细胞团块。3）缓冲液：确保缓冲液新鲜配置，无沉淀。
完全可以。FiniGet分必得®采用阴性分选技术，目标细胞表面不结合任何抗体或磁珠，处于未被激活的原始状态。因此，分选后的细胞可直接用于抗 CD3/CD28 抗体介导的 T 细胞激活和后续扩增培养，不会因分选过程导致非预期激活或功能干扰。
不适用。货号 120-6001 专门针对人 PBMC 样本设计。如需进行小鼠来源（脾脏、淋巴结）的 CD3+ T 细胞分选，请选用 FiniGet分必得®小鼠 CD3+ T 细胞分选试剂盒（130-6001）。
无柱分选（如 FiniGet分必得®方案）操作更简便、快速，无需额外购买昂贵的分离柱和配套设备，对操作人员技术要求较低，且避免了细胞过柱时的机械损伤风险，目标细胞回收率和活性较好。过柱法（阳性分选多采用）在分选极低丰度细胞时可能纯度略有优势，但操作繁琐且设备成本更高。
建议取少量（约 1×10⁵ cells）分选后的细胞，用荧光标记的抗人 CD3 抗体（如 FITC anti-human CD3，克隆号 OKT-3）进行染色，同时设置同型对照，通过流式细胞术检测 CD3 阳性细胞百分比。这是评估分选效果标准且可靠的方法。
相关产品：FiniGet分必得®人 CD3+ T 细胞分选试剂盒（120-6001）｜小鼠 CD3+ T 细胞分选试剂盒（130-6001）
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品牌：FiniGet分必得®｜细胞分选，温和有效
出品：信天翁生物科技（广州）有限公司
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