T 细胞分选：高纯度 Naive T 细胞获取技术指南
发布时间:2026-09-03
在免疫学基础研究、疫苗开发及过继性细胞治疗（如 CAR-T）等领域，获取高纯度、高活性的 Naive T 细胞（初始 T 细胞）是众多下游实验成功的基石。Naive T 细胞作为免疫应答的"初始状态"，尚未接触过其同源抗原，对于研究 T 细胞激活、分化以及信号转导等机制具有独特而重要的价值。
然而，外周血或组织样本中的细胞组成极其复杂，如何快速将稀少的 Naive T 细胞从中分离出来，同时避免其活化或表型改变，一直是实验中的关键挑战。简单的密度梯度离心法仅能依据细胞密度进行粗略分离，无法达到高纯度要求。
免疫磁珠分选（Immunomagnetic Cell Sorting）技术的出现，为解决这一难题提供了得力的工具。其中，基于阴性分选（Negative Selection）原理的策略，因其能较好保持目的细胞的"untouched"状态，正成为越来越多研究者的首选。
FiniGet分必得® 系列无柱阴性分选试剂盒遵循的是间接富集逻辑。其核心策略并非直接"钓取"目标细胞，而是"清除"所有非目标细胞。
该试剂盒内含针对非 Naive T 细胞（如其他免疫细胞亚群、记忆性 T 细胞等）表面特异性抗原的生物素标记抗体混合物。当这些抗体与样本共孵育后，会结合到非目标细胞上。随后加入的链霉亲和素包被的磁珠则会与这些生物素化抗体高亲和力结合，从而在非目标细胞表面形成一个"磁珠-抗体-细胞"的复合物。
当试管被置于配套的磁力架上时，这些携带磁珠的非目标细胞便会因磁场作用被吸附于管壁，而未被标记、处于"untouched"状态的目的 Naive T 细胞则保留在上清液中。只需简单的倾倒或移液，即可获得高度纯化的目标细胞。整个过程无需分选柱，操作简便快捷，大大降低了操作对细胞的物理损伤。
本流程以从 C57BL/6 小鼠脾脏中分选 Naive CD8+ T 细胞为例，基于 FiniGet分必得® 配套方案。
组织解离：在 70 μm 细胞筛网上研磨小鼠脾脏，以预冷的 FiniGet分必得® 细胞分选缓冲液（货号：140-2001） 冲洗细胞筛网，收集细胞悬液于 50 mL 离心管中。
离心收集：500g，离心 5 分钟，弃去上清。
重悬与计数：将细胞沉淀重悬于分选缓冲液中，调整细胞浓度至 1×10⁸ 个有核细胞/mL。
注：分选缓冲液推荐使用含 1 mM EDTA 和 2% 胎牛血清（FBS）的 PBS，需预先使用 0.22 μm 滤膜过滤除菌。缓冲液中应不含钙离子、镁离子和生物素。也可直接使用 FiniGet分必得® 配套细胞分选缓冲液（货号：140-2001）。
抗体孵育：吸取 100 μL 细胞悬液（含 1×10⁷ 个细胞）加入无菌流式管底部，加入 5 μL Mouse FcR Blocker，轻轻混匀。再加入 10 μL Mouse Naive CD8+ T Cell Isolation Cocktail，轻轻混匀，室温孵育 10 分钟。
磁珠孵育：孵育完成后，加入 10 μL Streptavidin Beads（使用前需在涡旋震荡仪上充分混匀约 30 秒），轻轻混匀，室温孵育 2.5 分钟。
注：磁珠在使用前需在涡旋震荡仪上充分混匀约 30 s，混匀后不可进行高速离心操作；若分选更大数量的细胞可按比例增加 Streptavidin Beads 的用量。
补液：孵育完成后，加入分选缓冲液将体积补至 2.5 mL，使用移液器轻轻吹打。
磁吸分离：将流式管置于 FiniGet分必得® 单孔磁力架（货号：140-2000） 中，室温静置 2.5 分钟。期间，被磁珠标记的非目标细胞会逐渐被吸附至靠近磁铁的管壁。
收集目标细胞：保持流式管在磁力架里，将细胞悬液轻柔、连贯地倾倒于无菌离心管中，倾倒状态下保持 2-3 秒再恢复正立。此悬液中即包含纯化的小鼠 Naive CD8+ T 细胞。
注：倾倒过程中流式管不能脱离磁力架。请勿摇晃或通过管口接触可能仍挂在流式管口的液滴，此液滴应丢弃。
洗涤与重悬：根据实验需要洗涤细胞后，将细胞重悬于所需缓冲液或培养基中，即可用于后续实验。
建议取少量分选前后的细胞，用流式细胞术检测 Naive CD8+ T 细胞的纯度与回收率。Naive CD8+ T 细胞的典型表型定义为 CD8⁺CD44⁻CD62L⁺。客户实测数据显示，使用 FiniGet分必得® 130-6013 试剂盒，C57BL/6 小鼠脾脏实测纯度可从分选前 7% 提升至分选后 90.28%。
FiniGet分必得® 无柱阴性分选试剂盒（信天翁生物）专为原代免疫细胞的稳定、高质量分离而设计，其核心优势在多个独立客户实测场景中得到了验证。
| 产品特性 | 说明 |
|---|---|
| 分选原理 | 免疫磁珠阴性分选（去除杂细胞，保留"untouched"靶细胞） |
| 操作时间 | 全程约 15 分钟，无需分选柱 |
| 样本兼容性 | 小鼠脾脏/淋巴结单细胞悬液；无需裂红、无需避光 |
| 配套货号 | 分选试剂盒（130-6013）、细胞分选缓冲液（140-2001）、磁力架（140-2000） |
| 关键性能 | 低丰度样本（起始占比 4-7%）分选后纯度可达 90% |
经 FiniGet分必得® 试剂盒分选获得的高纯度、无标记 Naive T 细胞，可广泛用于以下下游实验：
· T 细胞激活与增殖：研究 T 细胞活化信号及分化机制
· 单细胞测序：获得高质量转录组数据，避免磁珠或抗体干扰
· CAR-T 制备：作为基因编辑的优质起始细胞原料
· 免疫细胞共培养：研究 T 细胞与 DC、B 细胞等的相互作用
· 流式表型分析与细胞毒性实验
在实际操作中，纯度与回收率是一对需要平衡的指标。若需优先保证回收率，可尝试以下调整：
增加二次分离：将第一次磁吸后的上清液收集后，对残留的细胞沉淀进行重悬，再次置于磁力架上进行第二次分离，并将两次收集的上清液合并。这一步骤可以有效提升总体细胞得率。
优化孵育时间：在确保标记效率的前提下，可适当延长或缩短磁珠与细胞的孵育时间，以适应不同样本的特性。
谨慎调整倾倒力度：若采用倾倒法收集上清，动作应轻柔、稳定，避免搅动底部的细胞沉淀。
值得注意的是，通过优化操作提高回收率时，可能会观察到纯度有一定程度的下降，具体幅度因富集的细胞类型和样本状态而异。建议首次尝试优化时，分别检测两次收集组分的纯度，再决定是否合并。
A：阴性分选和阳性分选没有优劣之分，根据实验目的和预算选择即可。阴性分选去除非靶细胞，获得的细胞无磁珠、无抗体标记（untouched），适用于需要完全无标记的场景，如部分功能学研究、细胞培养和测序。阳性分选直接富集靶细胞、纯度高，同样不影响下游实验（包括 T 细胞激活与培养）。
A：常见原因包括：1）样本制备不佳，如细胞悬液中有过多碎片或死细胞；
2）孵育时间或温度不当，导致抗体-磁珠标记不充分；
3）磁力架静置时间过短，非目标细胞未被完全吸附；
4）收集上清时操作过猛，带起了管底沉淀。建议逐一排查并严格按照 FiniGet分必得® 说明书操作。
A：FiniGet分必得® 无柱分选方案以快速简便为核心。从细胞悬液制备完成后开始，整个抗体标记、磁珠孵育和磁力分离过程通常可在 15-20 分钟内完成，具体时间因试剂盒和操作熟练度略有差异。
A：针对低丰度样本，FiniGet分必得® 阴性分选体系依然表现出较强的杂细胞去除能力。客户实测数据显示，起始 CD8⁺ T 细胞占比仅 10% 的小鼠样本，分选后纯度仍可达 98%；起始 CD4⁺ T 细胞占比 8.54% 的脾脏样本，分选后纯度可达 95%。但分选效果受样本质量影响，建议优化上游样本制备步骤。
A：分选后获得的高活性、无标记细胞，可直接用于多种下游实验，包括 T 细胞激活与增殖实验、单细胞测序、T 细胞/B 细胞共培养、CAR-T 细胞制备、流式细胞术表型鉴定、细胞毒性杀伤实验以及转录组或蛋白质组学分析等。
咨询热线：400-090-1923
品牌：FiniGet分必得®｜无柱阴性分选，保留细胞天然状态
出品：信天翁生物科技（广州）有限公司
：下一页
其他相关推荐
产品推荐
小红书
抖音
公众号
积分商城
广州市黄埔区瑞和路39号G5座321-332号
客服二维码
