如何提升免疫磁珠分选的细胞回收率？FiniGet分必得®无柱阴性分选优化方案

Q: 为什么我进行二次分离后，纯度有时会下降？

这是正常的技术权衡。第一次磁吸后，上清液中主要是纯度高、未经标记的目的细胞。第二次磁吸是从剩余的非目的细胞悬液中进一步回收那些可能未被吸附的细胞，其中可能夹杂少量未被磁珠标记的非目的细胞。因此，二次收集的组分纯度通常会略低于第一次，但能提高总回收率。

发布时间:2026-07-10

本文探讨如何通过优化FiniGet分必得®无柱阴性分选试剂盒的操作步骤，在免疫磁珠分选实验中提高目的细胞回收率。内容涵盖负选原理、操作技巧及纯度与回收率的权衡，为广州及全国科研人员在T细胞分选、B细胞分选等实验中提供实用参考。

在免疫磁珠分选实验中，如何在纯度和回收率之间找到最佳平衡点，是许多科研人员关心的问题。FiniGet分必得®无柱阴性分选试剂盒（信天翁生物）的设计初衷，正是在确保高纯度的同时兼顾理想的细胞得率。不过，针对某些特定的实验需求，当需要优先获得更多目的细胞时，我们可以在标准流程基础上进行微调，以进一步提升回收率。

负选流程中提升回收率的核心思路

采用FiniGet分必得®无柱阴性分选试剂盒进行细胞分选时，其原理是利用生物素标记的抗体混合物和链霉亲和素磁珠，标记并去除样本中的非目的细胞，而所需的目的细胞则保持未标记状态，通过倾倒被收集起来。这种方式对细胞本身没有干预，能较大程度保留其原始状态，尤其适合T细胞激活、单细胞测序等对细胞活性要求极高的下游实验。

纯度与回收率在负选流程中通常呈反比关系。为了获得更高回收率而调整操作时，可能会观察到纯度有一定程度的下降，具体幅度因富集的细胞类型而异。下面的优化步骤可以帮助您在实验中更好地兼顾这两项指标。

提高细胞回收率的操作调整步骤

若希望在现有实验中获得更多目的细胞，可以在FiniGet分必得®试剂盒标准富集流程的基础上，增加一个简单的二次分离环节：

首次收集

按照说明书的标准操作，将试管置于FiniGet分必得®配套磁力架中进行孵育和磁极分离，孵育结束后将含有富集细胞的上清液倒入新试管中，上清液中即为需要得到的目的细胞，并将该试管置于一旁备用。

二次分离准备

从磁力架上取出含有磁珠标记非目的细胞的原始试管。

重悬与洗脱

向该试管中加入推荐缓冲液（推荐使用FiniGet分必得®细胞分选缓冲液），补充至分离前使用的相同体积。充分混匀样品，确保贴附在管壁上的细胞被完全洗脱下来。

重复磁吸

将试管再次插入磁力架中，进行第二次磁极分离。建议孵育时间与第一次分离保持一致，以确保磁珠标记的细胞被有效吸附。

合并富集组分

将第二次分离后倒出的上清液（即额外获得的目的细胞）转移至新管中。这部分细胞可以与第一次分离获得的富集细胞合并，从而提升总体的细胞回收率。

质量控制建议

如果您是首次尝试这一优化步骤，我们建议先不要立即合并两次倒出的上清液。可以分别取少量第一次和第二次分离的细胞样品，通过流式细胞术检测其目的细胞纯度。评估第二次倒出上清液的纯度是否符合您的实验要求后，再决定是否合并。这一谨慎的验证步骤，能帮助您更好地掌握调整幅度对实验结果的具体影响。

实验原理与上下游衔接

阴性分选技术之所以成为免疫细胞分离的常用方法，是因为它避免了抗体和磁珠与目的细胞直接结合，从而防止了可能的非特异性激活，这对于CAR-T、CAR-NK等细胞治疗研究中的T细胞培养、B细胞培养及免疫细胞共培养实验尤为重要。FiniGet分必得®系列试剂盒提供的无柱操作，简化了传统柱式分选的流程，在PBMC分离、原代免疫细胞分选等场景中，都能为后续单细胞测序或功能实验提供高质量、高活性的细胞样本。

科研高频FAQ

Q1：FiniGet分必得®无柱阴性分选试剂盒的阴性分选原理是什么？

该试剂盒采用免疫磁珠阴性分选技术。试剂盒中的生物素标记抗体会特异性地结合样本（如人PBMC）中的非目的细胞（如B细胞、NK细胞、单核细胞等），随后加入的链霉亲和素磁珠会结合这些抗体，从而标记非目的细胞。当试管置于磁力架上时，被磁珠标记的非目的细胞被吸附在管壁，而未被标记的目的细胞则保留在上清液中，通过简单的倾倒即可收集。