如何获得稳定可靠的土壤、粪便RNA？从腐殖酸污染到高质量RNA纯化的完整解决方案
发布时间:2026-08-11
在进行环境微生物研究、土壤生态分析或肠道菌群研究时，很多实验人员都会遇到一个共同问题：
为什么同样的RNA提取流程，用在土壤和粪便样本上却经常难以获得理想结果？
与常规细胞、组织样本相比，土壤和粪便属于典型的复杂环境样本。样本中不仅包含大量不同种类的微生物，还含有丰富的有机物、蛋白质、多糖以及腐殖酸等天然成分。这些复杂组分在RNA提取过程中容易与目标核酸共同存在，并影响后续RNA纯化质量。
尤其是在土壤样本中，腐殖酸等天然有机物是影响RNA实验的重要因素之一。即使RNA已经成功释放，如果这些抑制性成分没有被有效去除，也可能影响后续PCR、qPCR等分子检测实验的稳定性。
因此，土壤和粪便RNA提取真正的难点，并不只是"把RNA释放出来"，而是在复杂样本环境中实现RNA的有效分离与纯化。
从复杂环境样本中获取高质量RNA的可靠解决方案
针对这一需求，信天翁生物推出土壤、粪便RNA提取试剂盒（货号：400-107），专用于各种类型土壤和粪便样品的总RNA提取。本产品结合硅胶柱纯化技术与腐殖酸去除方案，能够有效去除腐殖酸等抑制因子，获得高质量RNA产物，可直接用于PCR、qPCR等下游实验。
产品核心优势
1. 针对复杂环境样本优化设计
土壤和粪便样本相比普通生物样本具有更高复杂性。信天翁生物土壤、粪便RNA提取试剂盒针对这类特殊样本进行优化，通过完整的裂解、抑制物去除、DNA去除以及RNA纯化流程，实现复杂样本中的RNA稳定回收。
试剂盒适用于：
· 不同类型土壤样本
· 粪便样本
· 含有复杂微生物群落的环境样本
2. 腐殖酸去除体系，提高RNA纯度
土壤样本中的腐殖酸是影响RNA实验的重要因素之一。试剂盒通过HAR Buffer系列体系辅助去除腐殖酸等干扰成分，降低环境样本中抑制物对RNA后续实验的影响。通过优化的处理流程，可帮助研究人员获得更加适合分子检测分析的RNA样本。
3. DNA去除与RNA纯化双柱设计
为了减少基因组DNA残留对RNA分析实验的影响，400-107试剂盒采用DNA清除柱与RNA结合柱组合设计。
实验过程中：
· 首先通过DNA Binding Buffer处理，并经过DNA清除柱去除DNA
· 随后利用RNA Binding Buffer促进RNA结合
· 最终通过RNA结合柱完成RNA纯化
该设计有助于获得更适用于RNA相关检测实验的样本。
4. 简洁稳定的柱纯化流程
操作流程清晰，重复性高，适合常规实验室开展环境样本RNA研究。
技术原理与实验流程解析
一、实验前准备
首次使用试剂盒时，需按照说明书要求，在Washing Buffer 1和Washing Buffer 2中分别加入指定体积的无水乙醇，并在瓶身做好标记。同时需注意，SRL buffer在低温贮存下易析出沉淀，使用前应置于55℃加热复溶并充分混匀；HAR Buffer 2A为白色悬浊液，每次吸取前务必摇匀。CFS buffer含挥发性有机组分，建议在通风良好处操作。
二、样本裂解与核酸释放
在含有玻璃珠的2 mL离心管中称入0.5克土壤或粪便样本，依次加入SRL buffer、HAR Buffer 1、水饱和酚（自备）和CFS buffer，经高速涡旋或珠磨仪充分振荡研磨，实现微生物细胞壁的物理破碎与化学裂解同步完成。离心后取上清液进入下一步。
三、腐殖酸选择性去除
将上清液转移至新管，加入HAR Buffer 2A和HAR Buffer 2B，涡旋混匀后冰上静置，使腐殖酸等抑制物形成不溶性沉淀，离心后小心转移上清液，此步骤是保证RNA纯度的核心技术环节。
四、基因组DNA清除与RNA柱纯化
在上清液中加入DNA Binding Buffer后转移至DNA清除柱，离心后弃去结合柱及吸附的DNA，保留含RNA的滤液。向滤液中加入RNA Binding Buffer，混匀后分批转移至RNA结合柱，经离心使RNA选择性吸附于硅胶膜上，杂质随滤液排出。
五、洗涤与洗脱
依次使用Washing Buffer 1和Washing Buffer 2对RNA结合柱进行两次洗涤，去除残留的蛋白质和盐分，随后空柱离心甩干乙醇。最后加入30-50 μL Elution Buffer，静置后离心洗脱，所得RNA即可用于下游实验或置于-80℃保存。
结果展示与性能对比
为了客观评估信天翁生物土壤、粪便RNA提取试剂盒（400-107）在实际应用中的表现，我们针对多种不同类型的土壤和粪便样本进行了系统性的提取测试。
比较信天翁和某进口品牌试剂盒提取不同类型土壤样本RNA时的腐殖酸去除效果，信天翁具有更强的腐殖酸去除性能 ：
测试结果表明，对于，该试剂盒提取的RNA A260/A280比值介于1.8–2.1之间，A260/A230比值>2.0，表明产物中蛋白质和多糖类、腐植酸类污染物的残留极低。
检测下游PCR实验的抑制效果
取100 ng RNA进行反转录，对获得的cDNA稀释5倍，最后取1 uL样本进行PCR扩增。扩增条带良好，杂质去除干净，无抑制。1：菜园土；2：发酵羊粪肥；3：营养土；4：塘泥；5：林下红土
适用研究领域
环境微生物研究
用于土壤微生物群落RNA分析，辅助研究环境条件变化下微生物基因表达变化。
土壤生态研究
适用于：
· 农业土壤研究
· 微生态变化分析
· 土壤功能微生物研究
肠道菌群研究
粪便样本是研究动物及人体肠道微生物的重要来源。该试剂盒可用于粪便总RNA提取，为微生物表达分析提供实验基础。
分子检测研究
提取获得的RNA可用于：
· PCR
· qPCR
等RNA相关实验。
常见问题 FAQ
Q1：HAR Buffer 2A出现白色浑浊是否正常？
正常。HAR Buffer 2A为白色固体悬浊液，使用前充分摇匀即可。
Q2：SRL buffer出现沉淀怎么办？
如果储存温度较低或气温变化大，SRL buffer可能出现沉淀。使用前将整瓶试剂置于55℃，待沉淀完全溶解后充分混匀即可使用。
Q3：为什么RNA产量偏低？
可能原因包括：
· 样本本身RNA含量较低
· 样本裂解不充分
· 样本投入量过多导致裂解体系不足
· Washing Buffer未按要求加入无水乙醇
针对低RNA含量样本，可适当增加样本量；若裂解不足，建议使用珠磨仪提高研磨效率。
Q4：RNA出现降解怎么办？
可能原因：
· 样本量过多
· RNase污染
建议：
· 适当减少样本投入量
· 使用RNase-free耗材
· 实验前对操作环境进行RNase去除处理
Q5：RNA纯度不足如何优化？
如果存在腐殖酸污染，可降低裂解环境温度；增加HAR Buffer 2A/2B用量。如果存在盐污染，可加入Washing Buffer 1后静置5分钟再离心。需要注意，上述优化可能影响RNA产量。
信天翁生物持续聚焦生命科学研究领域，为科研人员提供稳定、高效、易操作的核酸提取及细胞相关实验产品。土壤、粪便RNA提取试剂盒（400-107）针对复杂环境样本特点进行优化，为环境微生物研究、生态分析以及分子检测实验提供可靠的RNA提取方案。了解更多RNA提取方案，可参考土壤粪便RNA快速提取指南及多糖多酚植物RNA提取方案。
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