小鼠CD3 T细胞分选试剂盒哪个好？FiniGet分必得®130-6001七组流式实测数据
发布时间:2026-07-27
做小鼠T细胞实验，第一步往往是从脾脏里把CD3+T细胞分选出来。FiniGet分必得®130-6001小鼠CD3+T细胞分选试剂盒是一款阴性分离试剂盒，Cocktail抗体标记非T细胞，磁珠标记杂细胞，在磁场里被吸附，上清里的CD3+T细胞不被抗体标记，可以分离用于做下游实验。
这批数据来自广州、深圳的7个课题组，全部用130-6001做C57BL/6小鼠脾脏CD3+T细胞分选，其中1组带了S品牌的平行对照，2组配套使用了信天翁自研NeoMab系列CD3流式抗体。
一、实验条件
1. 分选试剂：FiniGet分必得®130-6001小鼠CD3+T细胞分选试剂盒
2. 分离原理：生物素标记Cocktail抗体结合非T细胞，链霉亲和素磁珠结合抗体，非T细胞在磁场中被吸附，上清即CD3+T细胞
3. 磁力架：FiniGet分必得®140-2000单管磁力架、140-2002八联管磁力架
4. 流式鉴定：NeoMab FITC Rat Anti-mouse CD3（克隆17A2，11-2003-12）、NeoMab AF647 Rat Anti-mouse CD3（克隆17A2，26-2003-12）
5. 小鼠品系：C57BL/6
6. 组织来源：脾脏单细胞悬液
7. 操作要点：脾脏研磨后过70μm筛网；缓冲液不能含钙镁离子和游离生物素；磁珠用前涡旋混匀。
二、7组实验流式纯度数据
| 客户 | 试剂盒&样本 | 分选前CD3占比 | 分选后纯度 | 备注 |
| 中山大学附属第一医院G老师 | 130-6001 / C57脾脏 | — | 90% | 标准操作 |
| 广州医科大学W老师 | 130-6001 / C57脾脏 | — | 98% | 标准操作 |
| 暨南大学Z老师 | 130-6001 / C57脾脏 | — | 99% | 标准操作 |
| 中山大学Z老师 | 130-6001 / C57脾脏 | 51.2% | 90% | 高起始占比样本；分选前1E8 |
| 中山大学中山眼科中心Z老师 | 130-6001 / C57脾脏 | 27% | 99% | S品牌对照（纯度98%）；NeoMab FITC CD3流抗（11-2003-12） |
| 中大北Y老师 | 130-6001 / C57脾脏 | 20%~30% | 93.4% | 红细胞占比约50%；NeoMab AF647 CD3流抗（26-2003-12） |
| 深圳湾J老师 | 130-6001 / C57脾脏 | 30% | 95% | 标准操作 |
三、数据怎么看
3.1 纯度区间90%~99%，中位值95%
7组数据里，3组纯度在98%以上（暨南大学Z老师99%、中山大学中山眼科中心Z老师99%、广州医科大学W老师98%），2组在95%左右（深圳湾J老师95%、中大北Y老师93.4%），2组在90%（中山大学附属第一医院G老师、中山大学Z老师）。
3.2 红细胞占比高样本亦能分选。
中大北Y老师这组纯度93.4%。这次实验的样本中脾脏红细胞占比约50%。
3.3 S品牌对照
中山大学中山眼科中心Z老师做了S品牌平行对照：同样2×10⁷上样，CD3起始占比27%，FiniGet分必得®纯度99%，S品牌纯度98%。1个百分点的差距在流式误差范围内，说明两款试剂在标准条件下纯度表现相当。这组实验同时用了NeoMab FITC anti-mouse CD3（17A2，11-2003-12）做流式鉴定，荧光信号清晰。
3.4 NeoMab流式抗体配套
2组实验用了信天翁自研NeoMab系列CD3流式抗体：中山大学中山眼科中心Z老师用FITC anti-mouse CD3（17A2，11-2003-12），中大北Y老师用AF647 anti-mouse CD3（17A2，26-2003-12）。克隆号都是17A2，这是抗小鼠CD3ε链的经典克隆，跟FiniGet分选试剂盒的Cocktail不冲突，分选后直接染CD3没有交叉干扰。
四、操作流程
方案A：140-2000单管磁力架（5mL流式管，最大2×10⁸细胞）
1. 脾脏研磨过70μm筛网，重悬到1×10⁸ cells/mL。
2. 加入5 μL Mouse FcR Blocker，混匀。
3. 每1×10⁷细胞加10μL Cocktail，混匀，室温10分钟。
4. 每1×10⁷细胞加7.5 μL磁珠（提前涡旋30秒），混匀，室温2.5分钟。
5. 补缓冲液到2.5mL，放磁力架上静置2.5分钟，倾倒上清即为CD3+T细胞。
6. 按需洗涤重悬，直接做下游实验。
方案B/C：140-2002八联管磁力架
操作逻辑跟方案A一样，磁力静置延长到5分钟。5mL管用移液器吸上清（不要直接倒），14mL大体积管适配多鼠合并样本，Cocktail和磁珠按总细胞数等比例放大。
缓冲液
用含1mM EDTA、2%FBS的无菌PBS，或FiniGet分必得®140-2001专用分选缓冲液。不能加钙镁离子和游离生物素，会干扰磁珠结合。
五、常见问题
Q1 130-6001分选得到的是哪些T细胞亚群？
CD3是T细胞共受体信号链，表达在所有成熟T细胞表面，包括αβT细胞和γδT细胞。130-6001阴性分离得到的是总CD3+T细胞，包含CD4+和CD8+亚群以及少量γδT细胞和NKT细胞。如果需要进一步细分亚群，可以在分选后用CD4和CD8流式抗体做二次鉴定，或者选用针对特定亚群的分选试剂盒（如130-6002分选CD4+T细胞、130-6003分选CD8+T细胞）。
Q2 分选后的CD3+T细胞能否固定后再做流式染色？
不建议先固定再染色。甲醛固定会交联蛋白，导致CD3表位构象改变，荧光抗体可能无法有效结合，出现假阴性或信号减弱。正确做法是分选后先用荧光抗体做活细胞表面染色，染色完成后如果需要固定保存，可以用1-4%多聚甲醛固定10-15分钟，固定后尽快上机检测。如果必须先固定（例如生物安全要求），建议使用商品化固定/破膜试剂盒，并提前验证固定后CD3抗体克隆号的兼容性。
Q3 阴性分离和阳性分离在CD3+T细胞分选中的区别是什么？
阳性分离用抗CD3磁珠直接结合T细胞，分选后细胞上会标记磁珠。阴性分离只标记非T细胞，磁珠和抗体不接触CD3+T细胞，细胞表面标记完整、无活化信号。
Q4 分选后CD3流式纯度偏低，排查思路是什么？
三个层面逐一排查。样本层面：脾脏是否充分研磨、过筛，死细胞和碎片是否过多，这些都会增加非特异性吸附。试剂层面：Cocktail和磁珠是否按细胞总量等比例添加，磁珠取用前是否涡旋30秒以上，孵育时间和温度是否达标。操作层面：磁力架静置时间是否足够，倾倒上清时管壁是否始终贴住磁极，缓冲液是否含EDTA（缺少EDTA会导致细胞结团）。逐一排除后基本能定位问题环节。
Q5 CD3+T细胞分选后适合做哪些下游实验？
阴性分离的CD3+T细胞无活化信号，适用范围广泛。常规下游包括：体外活化与增殖实验（anti-CD3/CD28磁珠或包板刺激）；T细胞亚群分化研究（在CD3+总群中进一步分析CD4/CD8比例变化）；流式表型分析（CD25、CD69、CTLA-4、PD-1等活化/抑制标记）；胞内细胞因子检测（IFN-γ、TNF-α、IL-2）；单细胞测序或RNA-seq。如需特定亚群，可在CD3+总群基础上做二次分选或流式分选。
六、保存与注意事项
1. 2~8℃避光冷藏，不能冷冻，未开封有效期12个月。
2. 磁珠用前必须涡旋30秒，不能高速离心。
3. 仅限科研体外细胞分离，不能用于临床诊断。
4. Cocktail加完后轻柔混匀，剧烈震荡会破坏抗体构象。
七、小结
7组实验数据，纯度区间90%~99%，中位值95%。1组Stemcell品牌对照中，FiniGet分必得®纯度99%对比S品牌 98%，表现相当。2组实验配套NeoMab CD3流式抗体（17A2克隆），荧光信号清晰。
同系列文章可看人CD3细胞分选实测汇总和小鼠CD4 T细胞分选实测汇总，更多产品信息见FiniGet品牌专区。
广州技术中心提供FiniGet分必得®小鼠细胞分离免费Demo测试，有CD3分选需求的课题组可以联系技术专员。
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