小鼠CD4 T细胞分离用什么试剂盒？FiniGet分必得®130-6002实测纯度95%以上附操作SOP
发布时间:2026-07-27
小鼠CD4+T细胞分选是动物免疫实验里最常用的操作之一。无论是做T细胞活化增殖、Th亚群极化分化，还是流式表型分析和单细胞测序，第一步都是把CD4+T细胞从脾脏单细胞悬液里干净地分离出来。FiniGet分必得®130-6002小鼠CD4+T细胞分选试剂盒是一款阴性分离试剂盒，用抗体标记非CD4细胞，磁珠把杂细胞拉走，上清留下的就是CD4+T细胞。因为磁珠不结合目标细胞，分选后得到的细胞表面不会带任何标记物。
过去半年，广州和中山的多所高校用这款试剂做了不少Demo测试。我们把其中6组有完整流式检测数据的实验记录整理出来，样本都是C57BL/6小鼠脾脏，其中2组带了国产N品牌和进口S品牌的平行对照。所有实验都留了原始流式图谱，给华南做动物免疫的课题组做个选型参考。
一、实验条件
1. 分选试剂：FiniGet分必得®130-6002小鼠CD4+T细胞分选试剂盒
2. 分离原理：生物素标记抗体结合非CD4细胞，链霉亲和素磁珠吸附杂细胞，上清即CD4+T细胞
3. 磁力架：FiniGet分必得®140-2000单管磁力架、140-2002八联管磁力架
4. 流式鉴定：NeoMab FITC Rat Anti-mouse CD4（克隆GK1.5，11-2004-1）、NeoMab PE Rat Anti-mouse CD4（克隆GK1.5，12-2004-1）
5. 小鼠品系：C57BL/6
6. 组织来源：脾脏单细胞悬液（新鲜或冻存复苏）
7. 操作要点：脾脏研磨后过40μm筛网；缓冲液不能含钙镁离子和游离生物素；磁珠用前涡旋混匀。
从 C57BL/6 小鼠脾脏细胞中分选 total CD4+ T 细胞，分选前后的细胞用 FITC Rat Anti-mouse CD4 Antibody（克隆号 GK1.5，货号 11-2004-1） 标记后进行流式细胞仪分析，分选前后 CD4+ T 细胞纯度分别为 22.9% 和 97.8%。
二、6组实验流式纯度数据
| 客户 | 试剂盒&样本 | 分选前CD4占比 | FiniGet分必得®分选后纯度 | 备注 |
| 广东医科大学Y老师 | 130-6002 / C57脾脏 | — | 97.3% | 标准操作 |
| 广州中医药大学H老师 | 130-6002 / C57脾脏 | 15.95% | 97.38% | 1.75E8上样 |
| 广州医科大学L老师 | 130-6002 / C57脾脏 | 13.4% | 98% | N品牌对照（纯度89.65%）；NeoMab FITC CD4流抗 |
| 合作实验室 | 130-6002 / C57脾脏 | 19% | 97% | NeoMab PE CD4流抗（12-2004-1） |
| 广州医科大学C老师 | 130-6002 / C57新鲜脾脏 | 21.28% | 98.24% | NeoMab FITC CD4流抗（11-2004-1） |
| 中山大学药学院L老师 | 130-6002 / C57新鲜脾脏 | 12.67% | 95% | S品牌对照（纯度90%）；客户认可纯度 |
三、数据怎么看
3.1 纯度全部在95%以上
6组分选纯度从95%到98.24%，没有一组低于95%。分选前CD4占比最低12.67%（中山大学药学院L老师，小鼠泡酒精时间较长细胞状态受损），最高21.28%（广州医科大学C老师），分选后纯度分别是95%和98.24%。说明不管起始CD4占比高低，分选纯度都能稳住。
3.2 品牌平行对照
这批数据里有2组品牌对照：
国产N品牌对照（广州医科大学L老师）：同样操作流程，FiniGet分必得®纯度98%，N品牌89.65%，差了8个百分点。
进口S品牌对照（中山大学药学院L老师）：FiniGet分必得®纯度95%，S品牌约90%，客户反馈认可FiniGet分必得®的纯度。
3.3 NeoMab流式抗体配套
3组实验用了信天翁自研NeoMab系列流式抗体做CD4鉴定：FITC anti-mouse CD4（11-2004-1）出现在广州医科大学L老师和C老师的实验中，PE anti-mouse CD4（12-2004-1）出现在合作科研平台的实验中。克隆号都是GK1.5，跟分选试剂盒配套使用，荧光信号清晰，纯度判定没有歧义。
四、操作流程
方案A：140-2000单管磁力架（5mL流式管，最大2×10⁸细胞）
1. 脾脏研磨过70μm筛网，重悬到1×10⁸ cells/mL。冻存脾脏复苏后加DNase I处理15分钟打散细胞团。
2. 加入5 μL Mouse FcR Blocker，轻轻混匀。每1×10⁷细胞加10μL Cocktail，混匀，室温10分钟。
3. 每1×10⁷细胞加7.5 μL磁珠（提前涡旋30秒），混匀，室温2.5分钟。
4. 补缓冲液到2.5mL，放磁力架上静置2.5分钟，倾倒上清即为CD4+T细胞。
5. 按需洗涤重悬，进行下游实验。
方案B/C：140-2002八联管磁力架
操作逻辑跟方案A一样，磁力静置延长到5分钟。5mL管用移液器吸上清（不要直接倒），14mL大体积管适配多鼠合并样本，Cocktail和磁珠按总细胞数等比例放大。
缓冲液
用含1mM EDTA、2%FBS的无菌PBS，或FiniGet分必得®140-2001专用分选缓冲液。不能加钙镁离子和游离生物素，会干扰磁珠结合。
五、常见问题
Q1 分选后CD4纯度偏低怎么排查？
先查样本：脾脏状态查或含太多组织碎片会引发非特异性吸附。再查试剂：Cocktail和磁珠有没有按细胞量匹配，磁珠用前涡旋了没有。最后查磁力分离：静置时间够不够，倒上清时管壁贴没贴住磁极。三个环节逐一排查。
Q2 为什么推荐使用CD4分阴性分选试剂盒？
阳性分离用磁珠直接结合目标CD4细胞。阴性分离只标记非CD4细胞，磁珠和抗体都不接触目标细胞，CD4+T细胞表面标记完整、无活化刺激，分选时间短、分选完可直接用于功能实验。对于需要检测CD4表面分子（如CD62L、CD25、CD69）或进行体外活化、增殖、极化实验的场景，阴性分离是更优选择。
Q3 阴性分离的CD4细胞能直接做体外活化实验吗？
可以。磁珠只标记杂细胞，CD4细胞表面没有抗体交联，也没受活化刺激，分完直接铺板。
Q4 脾脏单细胞悬液制备有哪些关键控制点？
取脾脏浸泡在缓冲液里，仔细剔除脾脏上附着的多余结缔组织和脂肪。把脾脏放在70 μm细胞过滤器上，取无菌注射器的活塞扁平的一端温和地研磨脾脏组织，过滤细胞。用缓冲液冲洗滤网。重复一次过滤洗涤。最后离心重悬。
Q5 分选后的CD4+T细胞适合做哪些下游实验？
阴性分离的CD4细胞表面标记完整、无活化信号，适用范围很广。常规下游包括：体外活化与增殖实验（anti-CD3/CD28磁珠或包板刺激）；T辅助细胞极化（Th1/Th2/Th17/Treg分化培养）；流式表型分析（CD25、CD69、Foxp3等标记检测）；胞内细胞因子染色（IFN-γ、IL-4、IL-17等）；单细胞测序或 RNA-seq。
六、保存与注意事项
1. 2~8℃避光冷藏，不能冷冻，未开封有效期12个月。
2. 磁珠用前必须涡旋30秒，不能高速离心。
3. 仅限科研体外细胞分离，不能用于临床诊断。
4. Cocktail加完后轻柔混匀，剧烈震荡会破坏抗体构象。
七、小结
6组实验数据，C57脾脏CD4分选纯度全部在95%以上。2组品牌对照中，FiniGet分必得®纯度均优于对照品牌。3组实验配套使用了NeoMab系列流式抗体做CD4鉴定，荧光信号清晰。
同系列文章可看人CD3细胞分选实测汇总和小鼠CD8 T细胞分选实测汇总，更多产品信息见FiniGet品牌专区。
广州技术中心提供FiniGet分必得®小鼠细胞分离免费Demo测试，有CD4分选需求的课题组可以联系技术专员。
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